[發(fā)明專利]水飛薊黃酮木脂素的去甲基衍生物及其制備方法和其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310428712.9
• 申請日: 2013-09-18
• 公開（公告）號: CN104447717A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設計）人: 楊東輝;張瑩;張英濤;蔡少青
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學
• 主分類號: C07D407/04
• 分類號: C07D407/04;A61P25/28;A61P35/00;C12P17/06;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種如式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物：?

2.權(quán)利要求1所述化合物、式Ⅲ所示化合物或式Ⅳ所示化合物的制備方法，?

包括下述步驟1）和2）：?

1）將含有式Ⅴ-式Ⅷ所示化合物的混合物加入培養(yǎng)基基礎中；所述培養(yǎng)基基礎為適合菌株Eubacterium?limosum?ZL-II?CGMCC?NO.6846生長或發(fā)酵的培養(yǎng)液；?

2）將含Eubacterium?limosum?ZL-II?CGMCC?NO.6846的菌液接種于步驟1）制備的培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)48h即得。?

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基基礎具體為庖肉培養(yǎng)?基基礎，其組成為：蛋白胨30.0g/L，牛肉粉5.0g/L，酵母5.0g/L，葡萄糖3.0g/L，磷酸二氫鉀5.0g/L，可溶性淀粉2.0g/L，溶劑為水。?

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述含Eubacterium?limosum?ZL-II?CGMCC?NO.6846的菌液的制備方法為：取Eubacterium?limosum?ZL-II?CGMCC?NO.6846的凍存液室溫融化，加入?yún)捬跻后w培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)24h，如此循環(huán)進行菌株的擴增。?

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的方法，其特征在于：所述含有式Ⅴ-式Ⅷ所示化合物的混合物具體為從菊科水飛薊屬植物水飛薊Silybum?marianum果實中采用甲醇提取的黃酮類化合物的混合物，該黃酮類化合物的混合物主要包括水飛薊素，所述水飛薊素包括水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭。?

6.根據(jù)權(quán)利要求2-5任一所述的方法，其特征在于：還包括分離純化步驟；所述分離純化步驟包括大孔吸附樹脂XAD-2分離純化過程、ODS中壓色譜分離純化過程和制備型高效液相色譜分離純化過程。?

7.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一所述的方法，其特征在于：?

所述大孔吸附樹脂XAD-2分離純化過程的條件為：將權(quán)利要求2中步驟2）所得的培養(yǎng)液進行如下操作，每24L的培養(yǎng)液，過濾得上清液，上樣于XAD-2大孔吸附樹脂柱，分別依次用去離子水、10%乙醇水溶液、30%乙醇水溶液、50%乙醇水溶液各6個柱體積和60%乙醇水溶液8個柱體積進行洗脫，收集60%乙醇洗脫液流分，去除溶劑得7.48g?Fr.1；所述柱子填料為XAD-2大孔吸附樹脂，1.7kg，粒度20-60目，平均表面積330m²/g，柱高×內(nèi)徑為450×90mm；所述柱體積具體指一個柱體積為1L；所述%指乙醇在乙醇水溶液中的體積百分數(shù)；?

所述ODS中壓色譜分離純化過程的條件為：將7.48g?Fr.1與11.22g反相硅膠ODS拌樣后干法上樣，柱子體積為36×460mm，填料為ODS，粒徑20-45μm，經(jīng)ODS中壓色譜甲醇-水系統(tǒng)洗脫分離，洗脫液的流速20ml/min，先以250ml40％甲醇水溶液洗脫，收集洗脫開始至第250ml的洗脫液，去除溶劑后獲得100.3mg的Fr.1-1；再以45％甲醇水溶液洗脫，收集洗脫開始至第700ml初的洗脫液，去除溶劑后得325.3mg的Fr.1-2；再收集第700ml末至第1600ml末的洗脫液，去除溶劑后得776.3mg的Fr.1-3；所述%指甲醇在甲醇水溶液中的體積百分數(shù)；?

所述制備型高效液相色譜分離純化過程的條件為：采用制備型高效液相色譜儀SHIMADZU?LC-20A，制備柱Inertsil?ODS-3column，柱高×內(nèi)徑為250×20mm，粒徑5μm，以甲醇和0.1％甲酸水溶液的混合液作為洗脫緩沖液進行等度洗脫，分別純化Fr.1-1、Fr.1-2和Fr.1-3，所述洗脫緩沖液中，甲醇體積百分含量為48%；所述0.1％甲酸水溶液中，甲酸的體積百分含量為0.1％；將100.3mg的Fr.1-1、325.3mg的Fr.?1-2和776.3mg的Fr.1-3分別用甲醇溶解為20.0mg/mL的制備母液，將母液分別進行高效液相色譜分離純化；每次進樣量1.0mL，流速10.0mL/min；針對Fr.1-1樣品，收集保留時間為38～41min的流分，去除溶劑后得到43.2mg的式Ⅳ所示化合物；針對Fr.1-2樣品，收集保留時間為45～53min的流分，去除溶劑后得到57.9mg的式Ⅲ所示化合物；針對Fr.1-3樣品中，先收集保留時間為63～72min的流分，去除溶劑后得到61.5mg的式Ⅱ所示的化合物，再收集保留時間為75～78min的流分，去除溶劑后得到26.3mg的式Ⅰ所示的化合物。?