[發(fā)明專(zhuān)利]一種以碳納米材料為受體的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310428463.3
• 申請(qǐng)日: 2013-09-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103487418A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉志洪;楊利;何夢(mèng)媛;吳正俊;湯志愷;王宇輝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州陽(yáng)普醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/64;C09K11/06
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專(zhuān)利代理有限公司 42102
• 代理人: 鄔麗明

1.一種以碳納米材料為受體的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法，其特征在于以水溶性的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料為熒光供體，以碳納米材料為熒光受體，按下列步驟操作：

（1）制備水溶性的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料并在其表面標(biāo)記單鏈核酸、多肽或蛋白，將帶有表面標(biāo)記的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料分散于緩沖液中，得到熒光供體溶液；

（2）制備碳納米材料，將碳納米材料分散于溶劑中，得到熒光受體溶液；

（3）將熒光供體溶液、熒光受體溶液和緩沖液按不同體積比混合后，得到熒光供體濃度相同、熒光受體濃度不同的各混合液，置于20～30℃孵育60～120min，在980nm激光器下測(cè)定各混合液的上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度，得到熒光猝滅效率最大的混合液中所對(duì)應(yīng)的熒光供體濃度和熒光受體濃度；

（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取熒光供體濃度和熒光受體濃度分別為熒光猝滅效率最大時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度的混合液7組，置于20～30℃孵育60～120min后，以其中一組混合液為空白樣，向其余各組混合液中分別加入已知濃度的目標(biāo)物，再置于37℃孵育90～120min；在980nm激光器下測(cè)定各組混合液的上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度，空白樣的熒光強(qiáng)度為F₀，加入目標(biāo)物的各組混合液的熒光強(qiáng)度為F，以（F-F₀）/F₀為縱坐標(biāo)，目標(biāo)物在混合液中的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（5）取步驟（4）所述熒光供體濃度和熒光受體濃度分別為熒光猝滅效率最大時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度的混合液，20～30℃孵育60～120min，加入未知濃度的目標(biāo)物樣品，再置于37℃孵育90～120min后，測(cè)定混合液的熒光強(qiáng)度F_x，計(jì)算（F_x-F₀）/F₀的值，代入步驟（4）得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再計(jì)算得到樣品中目標(biāo)物的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法，其特征在于所述水溶性上轉(zhuǎn)換熒光納米材料為粒徑30～100nm的球形納米材料，其表面修飾有氨基或羧基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法，其特征在于所述碳納米材料為碳納米顆粒、還原型氧化石墨烯、氧化石墨烯、或殼聚糖修飾的氧化石墨烯。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法，其特征在于所述目標(biāo)物為單鏈核酸、糖類(lèi)、或蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法，其特征在于所述目標(biāo)物為血清或全血中的單鏈核酸、糖類(lèi)、或蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法，其特征在于所述水溶性的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料由如下方法制備得到：

（1）配制稀土硝酸鹽溶液，所述稀土硝酸鹽溶液中，稀土離子摩爾比為釔離子：鐿離子：鉺離子為（60～90）：（5～35）：（0.5～10）；

（2）向步驟（1）所得稀土硝酸鹽溶液中加入低級(jí)醇、及水溶性稀土離子配體水溶液，混勻，所述低級(jí)醇為乙醇、正丙醇或正丁醇，所述水溶性稀土離子配體為聚丙烯酸、氨基乙基膦酸、或聚乙烯亞胺，所述稀土硝酸鹽與水溶性稀土離子配體的質(zhì)量比為0.162～1.01:1；

（3）向步驟（2）所得溶液中加入氟化鈉水溶液，得到均勻的混合液體；所得混合液體中，所述氟離子與總的稀土離子摩爾比為（5～16）:1，所述低級(jí)醇的體積占所述混合液體的體積的1/3～1/2；

（4）將步驟（3）所得混合液體于200～240℃水熱反應(yīng)10～24小時(shí)；

（5）冷卻至室溫后，分離純化固體產(chǎn)物，得到上轉(zhuǎn)換熒光納米材料。