[發(fā)明專利]一種以碳納米材料為受體的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201310428463.3
• 申請日: 2013-09-18
• 公開（公告）號: CN103487418A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉志洪;楊利;何夢媛;吳正俊;湯志愷;王宇輝
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C09K11/06
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 鄔麗明

1.一種以碳納米材料為受體的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測方法，其特征在于以水溶性的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料為熒光供體，以碳納米材料為熒光受體，按下列步驟操作：

（1）制備水溶性的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料并在其表面標(biāo)記單鏈核酸、多肽或蛋白，將帶有表面標(biāo)記的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料分散于緩沖液中，得到熒光供體溶液；

（2）制備碳納米材料，將碳納米材料分散于溶劑中，得到熒光受體溶液；

（3）將熒光供體溶液、熒光受體溶液和緩沖液按不同體積比混合后，得到熒光供體濃度相同、熒光受體濃度不同的各混合液，置于20～30℃孵育60～120min，在980nm激光器下測定各混合液的上轉(zhuǎn)換熒光強度，得到熒光猝滅效率最大的混合液中所對應(yīng)的熒光供體濃度和熒光受體濃度；

（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取熒光供體濃度和熒光受體濃度分別為熒光猝滅效率最大時所對應(yīng)的濃度的混合液7組，置于20～30℃孵育60～120min后，以其中一組混合液為空白樣，向其余各組混合液中分別加入已知濃度的目標(biāo)物，再置于37℃孵育90～120min；在980nm激光器下測定各組混合液的上轉(zhuǎn)換熒光強度，空白樣的熒光強度為F₀，加入目標(biāo)物的各組混合液的熒光強度為F，以（F-F₀）/F₀為縱坐標(biāo)，目標(biāo)物在混合液中的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（5）取步驟（4）所述熒光供體濃度和熒光受體濃度分別為熒光猝滅效率最大時所對應(yīng)的濃度的混合液，20～30℃孵育60～120min，加入未知濃度的目標(biāo)物樣品，再置于37℃孵育90～120min后，測定混合液的熒光強度F_x，計算（F_x-F₀）/F₀的值，代入步驟（4）得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再計算得到樣品中目標(biāo)物的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測方法，其特征在于所述水溶性上轉(zhuǎn)換熒光納米材料為粒徑30～100nm的球形納米材料，其表面修飾有氨基或羧基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測方法，其特征在于所述碳納米材料為碳納米顆粒、還原型氧化石墨烯、氧化石墨烯、或殼聚糖修飾的氧化石墨烯。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測方法，其特征在于所述目標(biāo)物為單鏈核酸、糖類、或蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測方法，其特征在于所述目標(biāo)物為血清或全血中的單鏈核酸、糖類、或蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上轉(zhuǎn)換熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測方法，其特征在于所述水溶性的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料由如下方法制備得到：

（1）配制稀土硝酸鹽溶液，所述稀土硝酸鹽溶液中，稀土離子摩爾比為釔離子：鐿離子：鉺離子為（60～90）：（5～35）：（0.5～10）；

（2）向步驟（1）所得稀土硝酸鹽溶液中加入低級醇、及水溶性稀土離子配體水溶液，混勻，所述低級醇為乙醇、正丙醇或正丁醇，所述水溶性稀土離子配體為聚丙烯酸、氨基乙基膦酸、或聚乙烯亞胺，所述稀土硝酸鹽與水溶性稀土離子配體的質(zhì)量比為0.162～1.01:1；

（3）向步驟（2）所得溶液中加入氟化鈉水溶液，得到均勻的混合液體；所得混合液體中，所述氟離子與總的稀土離子摩爾比為（5～16）:1，所述低級醇的體積占所述混合液體的體積的1/3～1/2；

（4）將步驟（3）所得混合液體于200～240℃水熱反應(yīng)10～24小時；

（5）冷卻至室溫后，分離純化固體產(chǎn)物，得到上轉(zhuǎn)換熒光納米材料。