[發明專利]一種鐵線蓮栽培品種多變海神的組織培養方法

有效

• 申請號: 201310428129.8
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103461130A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 王磊;程瑩;方炎明
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 沈根水

技術領域

本發明涉及的是一種鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法（“多變海神”?英文商品名為：Clematis?‘Proteus’），屬于植物組織培養技術領域。

背景技術

鐵線蓮屬(Clematis?L.)隸屬于毛茛科(Ranunculaceae)毛茛亞科(Subfam.?Ranunculoideae)銀蓮花族(Trib.?Anemoneae)鐵線蓮亞族(Subtrib.?Clematidinae)，常為多年生木質藤本。世界約有355種，我國有147種，其中93種為我國特有種，特有率為63.3%。

??其萼片花瓣狀，色彩豐富，形態多變，莖蔓生，利用葉柄攀援，生長適應性強，園藝用途廣泛，觀賞價值高，在垂直綠化中具有重要地位，享有“攀援植物皇后”之美稱。在日本和西方園林中，鐵線蓮已占有十分重要的地位，大部分植物園、公園和家庭花園都能見到它們絢麗多彩的身影。此外，該屬植物中的許多種如女萎(Clematis?apiifolia）、威靈仙(C.?chinensis)等作為藥用植物使用已久。

其種子較難發芽，多用扦插繁殖。采取組織培養法進行鐵線蓮“多變海神”（英文商品名為：Clematis?‘Proteus’）?的快速繁殖，建立叢生芽生根的無性繁殖體系,?有利于增大繁殖系數，對于鐵線蓮“多變海神”走向園藝應用具有較強的生產應用價值。

發明內容

本發明提出的是一種鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法，其目的是克服鐵線蓮“多變海神”現有繁殖技術所存在的缺陷，提高其繁殖系數以適應其引種推廣及園林應用的需求。

本發明的技術解決方案：一種鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法，包括如下步驟：

1）外植體消毒處理；

2）芽誘導和芽增殖。

所述的步驟1）外植體消毒處理?，具體包括：

①取鐵線蓮“多變海神”當年生的幼嫩莖節和頂芽；

②依次用自來水沖洗1?h，毛筆來回刷洗20次，于超凈工作臺上用質量濃度為75%乙醇滅菌20?s，無菌水沖洗2次，之后用質量濃度為0.1%氯化汞滅菌7?min，立即用無菌水沖洗4次；

③用滅菌濾紙吸干外植體表面水分，切除葉柄和兩端受傷部位；實驗統計的污染率分別為54%、36%，褐化率為44%、35%。

所述的步驟2）芽誘導和芽增殖，具體包括：

①誘導培養

沖洗后將外植體置于培養皿中，用剪刀、鑷子切除葉柄、兩端受傷部位后，將芽接種于已滅菌的誘導培養基1/2?MS+生長調節物質NAA?0.5mg/L+生長調節物質TDZ?1.0?mg/L?+質量濃度為3%的蔗糖20~30?g/L?+質量濃度為0.7%的瓊脂7g/L，pH值為5.8，培養4周，培養溫度25℃，光照16?h/d，照度2400?1x；

②不定芽增殖培養

??將誘導的叢生芽分成單芽，繼而將單芽接入1/2?MS?+?生長調節物質6-BA?1.0?mg/L?+?生長調節物質KT?0.5mg/L?+?生長調節物質NAA?0.5?mg/L?+質量濃度為3%的蔗糖20~30?g/L?+質量濃度為0.7%的瓊脂7g/L，的培養基，pH值為5.8，培養4周，溫度、光照條件同①叢生芽誘導；

③壯苗培養

將增殖培養基中葉色濃綠、長度為1~2?cm的不定芽逐個切下，接入MS基本培養基中培養4星期，光照條件同①叢生芽誘導；

④生根培養

將壯苗培養后長勢旺盛的芽接入生根培養基1/2?MS+生長調節物質IBA?0.3?mg/L中，培養40天。溫度、光照條件同①叢生芽誘導；

⑤煉苗和移栽

將生根的鐵線蓮“多變海神”植株的培養瓶瓶蓋打開，室溫下煉苗6?d后，取出試管苗，洗凈，移栽到準備好的珍珠巖、蛭石、泥炭珍珠巖，其重量比為珍珠巖：蛭石：泥炭=1:1:1的營養缽中，保持濕度85%~95%，溫度、光照條件同②叢生芽誘導，成活率達95%。

本發明的優點：應用組織培養方法，能較好地保持母本的觀賞價值，有效地提高鐵線蓮“多變海神”的繁殖系數。與扦插繁殖相比，生長周期大幅縮短，組織培養法的繁殖系數為扦插繁殖的50~60倍。品種優質、產量可觀和便于實地推廣。

具體實施方式

實施例

一種鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法，其培養步驟如下：

步驟一、外植體消毒處理