[發明專利]一種鐵線蓮栽培品種多變海神的組織培養方法

有效

• 申請號: 201310428129.8
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103461130A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 王磊;程瑩;方炎明
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 沈根水

1.一種鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法，其特征是該方法包括如下步驟：

1）外植體消毒處理；

2）芽誘導和芽增殖。

2.根據權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法，其特征是所述的步驟1）外植體消毒處理，具體包括：

①取鐵線蓮“多變海神”當年生的幼嫩莖節和頂芽；

②依次用自來水沖洗1?h，毛筆來回刷洗20次，于超凈工作臺上用質量濃度為75%乙醇滅菌20?s，無菌水沖洗2次，之后用質量濃度為0.1%氯化汞滅菌7?min，立即用無菌水沖洗4次；

③用滅菌濾紙吸干外植體表面水分，切除葉柄和兩端受傷部位；實驗統計的污染率分別為54%、36%，褐化率為44%、35%。

3.根據權利要求1所述的鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法，其特征是所述的步驟2）芽誘導和芽增殖，具體包括：

①誘導培養

沖洗后將外植體置于培養皿中，用剪刀、鑷子切除葉柄、兩端受傷部位后，將芽接種于已滅菌的誘導培養基1/2?MS+生長調節物質NAA?0.5mg/L+生長調節物質TDZ?1.0?mg/L?+質量濃度為3%的蔗糖20~30?g/L?+質量濃度為0.7%的瓊脂7?g/L，pH值為5.8，培養4周，培養溫度25℃，光照16?h/d，照度2400?1x；

②不定芽增殖培養

將誘導的叢生芽分成單芽，繼而將單芽接入1/2?MS?+?生長調節物質6-BA?1.0?mg/L?+?生長調節物質KT?0.5mg/L?+?生長調節物質NAA?0.5?mg/L?+質量濃度為3%的蔗糖20~30?g/L?+質量濃度為0.7%的瓊脂7?g/L的培養基，pH值為5.8，培養4周，溫度、光照條件同①叢生芽誘導；

③壯苗培養

將增殖培養基中葉色濃綠、長度為1~2?cm的不定芽逐個切下，接入MS基本培養基中培養4星期，光照條件同①叢生芽誘導；

④生根培養

將壯苗培養后長勢旺盛的芽接入生根培養基1/2?MS+生長調節物質IBA?0.3?mg/L中，培養40天；溫度、光照條件同①叢生芽誘導；

⑤煉苗和移栽

將生根的鐵線蓮“多變海神”植株的培養瓶瓶蓋打開，室溫下煉苗6?d后，取出試管苗，洗凈，移栽到準備好的由珍珠巖、蛭石、泥炭組成的營養缽中，珍珠巖、蛭石和泥炭間的重量比為1:1:1，保持濕度85%~95%，溫度、光照條件同(2)叢生芽誘導，成活率達95%。

4.根據權利要求3所述的一種鐵線蓮栽培品種“多變海神”的組織培養方法，其特征是所述的MS基本培養基是由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分所組成。