[發(fā)明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310426660.1
• 申請(qǐng)日: 2013-09-18
• 公開（公告）號(hào): CN103495166A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李陽;閆艷麗;劉雪;王二先;徐曉艷;盛璐絲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江美保龍生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/42
• 分類號(hào): A61K39/42;A61K39/12;A61P37/04
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

1.一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟：

1）種細(xì)胞的培養(yǎng)：用細(xì)胞生長液培養(yǎng)種子細(xì)胞；

2）制苗用細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)：將步驟1）中培養(yǎng)好的種子細(xì)胞懸液接種至已驗(yàn)證的灌注袋中，吸附后在激流灌注式生物反應(yīng)器中加入細(xì)胞生長液進(jìn)行培養(yǎng)；

3）病毒的培養(yǎng)與收獲：當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)4～6天，將藍(lán)耳病病毒CH-1R株懸液接種于激流灌注式生物反應(yīng)器中，換用維持液進(jìn)行培養(yǎng)，接毒后實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)糖耗情況，當(dāng)糖耗接近0時(shí)，即開始收獲病毒，收獲病毒后，反復(fù)凍融灌注袋，收獲全懸病毒液，測(cè)定毒價(jià)；

4）將上述收獲的全懸病毒液與雞抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒卵黃抗體進(jìn)行混合吸附；

5）將吸附后的抗原抗體復(fù)合物加入含免疫增強(qiáng)劑凍干保護(hù)劑，分裝后經(jīng)冷凍真空干燥制成豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗。

2.如權(quán)利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于所述的步驟1）中種細(xì)胞為細(xì)胞MA104或細(xì)胞Marc145。

3.如權(quán)利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于所述的步驟2）中培養(yǎng)條件為溫度36～37℃，pH7.2～7.4，DO?30%～60%，循環(huán)轉(zhuǎn)速按40rpm、60rpm、90rpm、120rpm、150rpm梯度提高，種子細(xì)胞接種量為3×10⁹個(gè)細(xì)胞。

4.如權(quán)利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于所述的步驟3）培養(yǎng)條件為溫度36～37℃，pH7.5～7.6，DO?30%～50%，循環(huán)速度100～150rpm，藍(lán)耳病病毒CH-1R株接種量為0.5～1.0MOI。

5.如權(quán)利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于所述的細(xì)胞生長液含90%DMEM、10%胎牛血清，其pH為7.2～7.4、DO為30%～60%，含糖4.0g/L，維持液含98%DMEM、2%胎牛血清，其pH為7.4～7.6、DO為30%～50%，含糖4.0g/L。

6.如權(quán)利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于所述的步驟4）中抗原抗體比例為1:1，其中每毫升抗原含病毒TCID₅₀為10^8.0，每毫升雞抗豬呼吸與繁殖綜合征病毒卵黃抗體效價(jià)為1:1024。

7.如權(quán)利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于所述的步驟4）中抗原抗體復(fù)合物孵育溫度為4℃混合孵育16小時(shí)。

8.如權(quán)利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征復(fù)合活疫苗的制備方法，其特征在于所述的步驟5）中含免疫增強(qiáng)劑凍干保護(hù)劑為每1000ml磷酸緩沖液中含有中藥多糖30～100g、中藥黃酮20～60g、維生素組合6～10g、法氏囊素2～16mg、明膠4～6g、蔗糖40～70g，所述的中藥多糖和中藥黃酮從以下中藥組合物中提取得到：生地、懷牛膝、桑白皮、茯苓、蘆根、淫羊藿、生甘草和問荊，所述的維生素組合含有維生素B1、維生素C和維生素E。