[發(fā)明專利]一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310425334.9
• 申請日: 2013-09-18
• 公開（公告）號: CN103484523A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 畢相東;張樹林;郭永軍;戴偉;邢克智
• 申請（專利權(quán)）人: 天津農(nóng)學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 天津市鼎和專利商標(biāo)代理有限公司 12101
• 代理人: 劉英梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水體污染控制領(lǐng)域，特別是涉及一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法。

背景技術(shù)

微囊藻(Microcystis?sp.)是全球廣布性的水華藍(lán)藻種類，也是我國富營養(yǎng)化水體中最常見的藍(lán)藻水華主要構(gòu)成種類。微囊藻在實驗室培養(yǎng)條件下通常以單細(xì)胞或雙細(xì)胞形式存在，而在野外自然水體中是以大量肉眼可見的群體形式存在。現(xiàn)在有關(guān)野外微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法有漩渦震蕩法、煮沸法、二氧化鈦或紫外線處理法，然而在漩渦震蕩法作用下囊藻群體細(xì)胞無法完全分散為單細(xì)胞，而在煮沸法、二氧化鈦或紫外線處理法作用下微囊藻群體細(xì)胞均有不同程度的破損，因而上述計數(shù)方法均不同程度地降低了微囊藻群體細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就在于提供一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，用于人工供水系統(tǒng)、湖泊、水庫和池塘等各種淡水水體經(jīng)常爆發(fā)藍(lán)藻水華的水體中微囊藻密度的監(jiān)控，用于自然水體中微囊藻細(xì)胞數(shù)目的常規(guī)監(jiān)測及微囊藻水華的預(yù)警與防治。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，包括下述步驟：

（1）定量采取微囊藻水華爆發(fā)盛期的自然水體的水樣；

（2）將采集到的水樣經(jīng)孔徑不大于2μm的篩網(wǎng)過濾，微囊藻樣品附著在篩網(wǎng)上；

（3）將過濾后附著在篩網(wǎng)上的微囊藻群體樣品再次懸浮在濃度為10^-3mol/L?EDTA溶液的燒杯中；

（4）向上述燒杯加入小玻璃珠后，磁力攪拌；

（5）吸取顯微鏡下觀察已完全分散開來的微囊藻單細(xì)胞樣品，采用血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目。

所述步驟(2)中，所述篩網(wǎng)為孔徑0.45μm的微孔濾膜或孔徑不大于2μm的篩絹。

所述步驟(3)中，利用移液槍吸取EDTA溶液反復(fù)沖洗篩網(wǎng)，直至微囊藻群體完全從篩網(wǎng)上洗脫下來。

所述步驟(4)中，在磁力攪拌過程中，在顯微鏡下每過5分鐘查看微囊藻群體細(xì)胞分散過程，直至微囊藻群體細(xì)胞完全分散為單細(xì)胞。

所述步驟(4)中，磁力攪拌速度1000-2000轉(zhuǎn)/min，磁力攪拌時間90-110min。

所述步驟(5)中，吸取微囊藻單細(xì)胞樣品前，要混合均勻后再吸取，并將血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目換算成每升水樣的微囊藻細(xì)胞數(shù)量。

本發(fā)明的有益效果是：可以克服漩渦震蕩法作用下囊藻群體細(xì)胞無法完全分散為單細(xì)胞及煮沸法、二氧化鈦或紫外線處理法作用下微囊藻群體細(xì)胞均有不同程度的破損的缺陷，可準(zhǔn)確計數(shù)自然水體中微囊藻群體細(xì)胞的數(shù)目。實驗步驟簡單，耗時較短，且可準(zhǔn)確提高計數(shù)微囊藻群體細(xì)胞的數(shù)目。廣泛應(yīng)用于人工供水系統(tǒng)、湖泊、水庫和池塘等各種淡水水體微囊藻水華的防控。

附圖說明

圖1是微囊藻群體在本發(fā)明方法作用下第一實施例的形態(tài)的變化。

圖2是微囊藻群體在本發(fā)明方法作用下第二實施例的形態(tài)的變化。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式和附圖對本發(fā)明作進一步詳細(xì)說明：

本發(fā)明的微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，包括下述步驟：

（1）定量采取微囊藻水華爆發(fā)盛期的自然水體的水樣；

（2）將采集到的水樣經(jīng)孔徑不大于2μm的篩網(wǎng)過濾，微囊藻樣品附著在篩網(wǎng)上；

（3）將過濾后附著在篩網(wǎng)上的微囊藻群體樣品再次懸浮在濃度為10^-3mol/L?EDTA溶液的燒杯中；

（4）向上述燒杯加入小玻璃珠后，磁力攪拌；

（5）吸取顯微鏡下觀察已完全分散開來的微囊藻單細(xì)胞樣品，采用血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目。

所述步驟(2)中，所述篩網(wǎng)為孔徑0.45μm的微孔濾膜或孔徑不大于2μm的篩絹。

所述步驟(3)中，利用移液槍吸取EDTA溶液反復(fù)沖洗篩網(wǎng)，直至微囊藻群體完全從篩網(wǎng)上洗脫下來。

所述步驟(4)中，在磁力攪拌過程中，在顯微鏡下每過5分鐘查看微囊藻群體細(xì)胞分散過程，直至微囊藻群體細(xì)胞完全分散為單細(xì)胞。

所述步驟(4)中，磁力攪拌速度1000-2000轉(zhuǎn)/min，磁力攪拌時間90-110min。

所述步驟(5)中，吸取微囊藻單細(xì)胞樣品前，要混合均勻后再吸取，并將血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目換算成每升水樣的微囊藻細(xì)胞數(shù)量。

高速磁力攪拌結(jié)合玻璃珠的作用，在EDTA溶液的配合下可將細(xì)菌及真菌細(xì)胞的胞外多糖洗脫下來且不破壞細(xì)菌或真菌細(xì)胞的完整性。

實施例1本發(fā)明方法應(yīng)用于自然水體微囊藻細(xì)胞密度監(jiān)測的實例