[發明專利]檢測彌散粘附性大腸埃希氏菌的引物、探針及方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201310424938.1
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103451305A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 王雷;莫莎;王曉艷;張志強
• 申請（專利權）人: 北京卓誠惠生生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 穆宏平

1.一種用于檢測彌散粘附性大腸埃希氏菌的特異性引物，其核苷酸序列為：

上游引物：GGCCACGGAGAGTTATCAGTTT，

下游引物：AGCAGAAAAGCCGGAATGC。

2.與權利要求1所述引物配合使用的熒光探針，其核苷酸序列為：

Fam-TATCCCTCAGGTGGCACTGCGTCC-BHQ1。

3.一種彌散粘附性大腸埃希氏菌的檢測方法，其特征在于，以樣品總DNA為模板，利用權利要求1所述的引物和權利要求2所述的探針進行實時熒光定量PCR，根據擴增曲線判定結果。

4.含有權利要求1所述引物和/或權利要求2所述探針的試劑盒。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：陽性對照，DNA聚合酶，反應體系緩沖液，Mg²⁺，dNTP和超純水。

6.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其工作反應體系為：Hotstar?DNA聚合酶1-2U，5×PCR?buffer（Tris-HCl100mM(PH8.3)，KCl250mM，Tween-200.2%）5μL，10mM?dNTP0.5～1.5μL，25mM?MgCl₂2～5μL，引物探針混合物1.25μL，DNA模板2μL，超純水補至25μL。

7.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其工作程序為：

95℃預變性10min，1個循環；95℃變性30s，55-62℃退火延伸30～60s，40個循環；4℃保持。