[發明專利]一種楤木懸浮細胞培養的方法

無效

• 申請號: 201310423763.2
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103444547A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 楊存
• 申請（專利權）人: 南京通澤農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及植物組織培養的快繁方法，屬于植物技術領域。

背景技術

楤木，五加科，小喬木或灌木，別名仙人仗、鵲不踏、刺包頭，分布黃河以南至兩廣北部、西南、東南各省區。生于林內、林緣或灌叢中，喜生于溝谷、陰坡、半陰坡海拔250~1000m的雜樹林、闊葉林、闊葉混交林或次生林中。耐寒，但在陽光充足、溫暖濕潤的環境下生長更好。空氣濕度在30%~60%之間，喜肥沃而略偏酸性的土壤。楤木以根皮和莖入藥，藥材味苦、辛，性平。有補氣安神、強精滋腎、健胃利水、祛風除濕、活血止痛的功用。楤木主治神經衰弱、風濕性關節炎、肝炎、慢性胃炎、胃痙攣、胃及十二指腸潰瘍、腎炎水腫、糖尿病及陽虛氣弱、慢性病氣虛無力、顱外傷后無力綜合癥、腎虛陽痿等癥，還具有降血壓、降血糖及抗放射的作用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種楤木懸浮細胞的培養方法，由該方法可以獲得大量的楤木懸浮細胞，并規模化的為藥廠提供制藥的原料。

本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的：

將楤木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的楤木無菌葉片接種到愈傷組織誘導培養基MS+NAA0.5mg/L+IBA?3mg/L中進行愈傷組織誘導，培養條件為溫度25℃，暗室培養，濕度30%~60%，將楤木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養基MS+6-BA?1mg/L+2，4-D?0.3?mg/L中進行增殖培養，培養條件溫度25℃，光照強度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，濕度30%~60%，增殖后的楤木愈傷組織接種到MS+KT0.3mg/L+TDZ0.1mg/L培養基中，每50ml懸浮細胞添加100ml培養液，接種于250ml錐形瓶中進行懸浮振蕩培養，繼代培養3代，獲得大量的楤木懸浮細胞。

采用本發明制備的楤木懸浮細胞，周期短，產量大，能耗少，利于大生產操作。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

實施例1

將楤木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的楤木無菌葉片接種到愈傷組織誘導培養基MS+NAA?0.5mg/L+IBA3mg/L中進行愈傷組織誘導，培養條件為溫度25℃，暗室培養，濕度30%~60%，將楤木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養基MS+6-BA?1mg/L+2，4-D?0.2?mg/L中進行增殖培養，培養條件溫度25℃，光照強度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，濕度30%~60%，增殖后的楤木愈傷組織接種到MS+KT0.2mg/L+TDZ0.05mg/L培養基中，每50ml懸浮細胞添加100ml培養液，接種于250ml錐形瓶中進行懸浮振蕩培養，繼代培養3代，獲得大量的楤木懸浮細胞。

實施例2

將楤木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的楤木無菌葉片接種到愈傷組織誘導培養基MS+NAA?0.5mg/L+IBA3mg/L中進行愈傷組織誘導，培養條件為溫度25℃，暗室培養，濕度30%~60%，將楤木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養基MS+6-BA?2mg/L+2，4-D0.5?mg/L中進行增殖培養，培養條件溫度25℃，光照強度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，濕度30%~60%，增殖后的楤木愈傷組織接種到MS+KT0.4mg/L+TDZ0.2mg/L培養基中，每50ml懸浮細胞添加100ml培養液，接種于250ml錐形瓶中進行懸浮振蕩培養，繼代培養3代，獲得大量的楤木懸浮細胞。

實施例3