[發(fā)明專利]一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310423763.2
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103444547A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊存
• 申請（專利權(quán)）人: 南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，包括無菌葉片的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的增殖，懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)和優(yōu)化，其主要步驟如下：

（1）按照常規(guī)植物組織培養(yǎng)的消毒方法對楤木葉進(jìn)行消毒處理，獲得無菌的楤木葉片；

（2）將步驟（1）所獲得的楤木無菌葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA?0.5mg/L+IBA?3mg/L中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)；

（3）將步驟（2）誘導(dǎo)出來的楤木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基MS+6-BA?1-2mg/L+2，4-D?0.2-0.5?mg/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；

（4）將步驟（3）增殖過的楤木愈傷組織接種到MS+KT0.2-0.4mg/L+TDZ0.05-0.2mg/L培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3代，得到楤木懸浮細(xì)胞。

2.按照權(quán)利要求1所述的一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于：步驟中所述無菌的楤木葉片按下列消毒方法得到：將楤木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分。

3.按照權(quán)利要求1所述的一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于：步驟中楤木愈傷組織誘導(dǎo)的條件為溫度25℃，暗室培養(yǎng)，濕度30%~60%。

4.按照權(quán)利要求1所述的一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于：步驟中楤木愈傷組織增殖的條件為溫度25℃，光照強度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，濕度30%~60%。

5.按照權(quán)利要求1所述的一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于：步驟中愈傷組織懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，每50ml懸浮細(xì)胞添加100ml培養(yǎng)液，接種于250ml錐形瓶中進(jìn)行懸浮振蕩培養(yǎng)。