[發(fā)明專利]一種可用于結(jié)核感染診斷的結(jié)核分枝桿菌重組抗原的制備

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310422989.0
• 申請(qǐng)日: 2013-09-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103525829A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王宏偉;高千;張俠;蘇忠蘭;易龍;丁一冰;田曼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)(蘇州)高新技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): C12N15/31
• 分類號(hào): C12N15/31;C12N15/70;C12N15/10;C07K14/35;C12Q1/68;C12Q1/04;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京三聚陽(yáng)光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 李紅團(tuán)

1.一種編碼結(jié)核分枝桿菌重組抗原ESPC的重組DNA，其特征在于所述重組DNA的序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.一種結(jié)核分枝桿菌重組抗原ESPC，其特征在于所述重組抗原ESPC的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.一種表達(dá)載體，其特征在于其含有如權(quán)利要求1所述的重組DNA。

4.一種如權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體，其特征在于所述表達(dá)載體是pET-32a-ESPC，其通過(guò)將SEQ?ID?NO.1所示DNA克隆到pET32a表達(dá)載體的Eco?I和Hind?III酶切位點(diǎn)制備而成。

5.一種用于制備權(quán)利要求1所述重組DNA的方法，其特征在于，以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組序列為模板，用引物P1和P2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中引物P1和P2的序列如下：

引物P1：GGAATTCCATATGACGGAAAACTTGACCGTCCAG

引物P2：CCCAAGCTTTCAGGTAAACAACCCGTCGATAGC。

6.一種用于制備如權(quán)利要求2所述結(jié)核分枝桿菌重組抗原ESPC的方法，其特征在于通過(guò)將如權(quán)利要求3或4所述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，通過(guò)異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)，經(jīng)金屬螯合層析及凝膠過(guò)濾層析分離而制備獲得。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述大腸桿菌為BL-21(DE3)。

8.一種組合物，其特征在于包含如權(quán)利要求2所述結(jié)核分枝桿菌重組抗原ESPC。

9.一種試劑盒，其特征在于包含如權(quán)利要求2所述結(jié)核分枝桿菌重組抗原ESPC。

10.如權(quán)利要求1所述重組DNA或者如權(quán)利要求2所述結(jié)核分枝桿菌重組抗原ESPC用于制備檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌感染的試劑、組合物或試劑盒的用途。