[發明專利]棘白菌素B母核的提取方法

在審

• 申請號: 201310420360.2
• 申請日: 2013-09-13
• 公開（公告）號: CN104447961A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 李繼安;陳舟舟;史洲洋;沈劍鋒;姚黎棟;石飛燕;林惠敏;陳代杰;周煒祥;韓建棟
• 申請（專利權）人: 浙江震元制藥有限公司;上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/22
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

本發明公開了一種棘白菌素B母核的提取方法，包括以下步驟：（1）去除棘白菌素B母核的轉化液中的固體物質，得濾液，調節濾液pH至3?5，上大孔吸附樹脂，用pH3?5的無機酸水溶液洗脫，再用含脂肪醇的無機酸水溶液洗脫，收集洗脫液A；（2）將洗脫液A濃縮，調節pH至3?5，得濃縮液；（3）將濃縮液上十八烷基鍵合硅膠層析柱、八烷基鍵合硅膠層析柱或圓形微球樹脂層析柱，用pH3?5的無機酸水溶液洗脫，再用含脂肪醇的無機酸水溶液洗脫，得洗脫液B；（4）將洗脫液B濃縮。本發明的棘白菌素B母核的提取方法色素去除率達95%以上，產品的收率在70%，棘白菌素B母核的純度為97%以上。

技術領域

本發明涉及棘白菌素B母核的提取方法。

背景技術

棘白菌素類是21世紀上市的一種新型的抗真菌抗生素，其作用靶點為β-1，3-葡聚糖合成酶，該酶特異性的存在于真菌中，因此能夠抑制真菌細胞壁的合成導致真菌細胞溶解死亡。目前已經上市的阿尼芬凈是由棘白菌素B (Echinocandin B，簡稱ECB)通過微生物轉化得到棘白菌素B母核 (Echinocandin B Nucleus簡稱ECBN)，再通過化學合成加入特定側鏈基團制備獲得。

棘白菌素B母核作為生產阿尼芬凈的中間體，其分離方法文獻報道較少。中國專利CN102336817A公開了棘白菌素B母核的分離方法，該分離方法也是使用樹脂吸附再洗脫的方法，但是該方法使用了較大量的溶劑沖洗，且終產品色素殘留多，純度和收率偏低等缺點，極大的制約了棘白菌素B母核的發展。而現有技術中尚未有純度高和色素殘留少的棘白菌素B母核的制備方法及其制得的產品的相關報道，該現象亟待解決。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服現有技術中棘白菌素B母核提取時使用溶劑量大，終產品色素殘留多，純度和收率偏低等的缺點，提供一種棘白菌素B母核的提取方法。本發明的棘白菌素B母核的制備方法使用溶劑少，方法操作簡便，收率高，適用于工業化生產；制得的棘白菌素B母核色素幾乎完全被去除，色素去除率達95％，產品的收率在70％左右，最終棘白菌素B母核的純度為97％左右。

本發明的目的在于，提供一種棘白菌素B母核的提取方法，所述的提取方法包括以下步驟：

(1)去除棘白菌素B母核的轉化液中的固體物質，得濾液，調節濾液 pH至3-5，上大孔吸附樹脂，用pH3-5的無機酸水溶液洗脫，再用含脂肪醇的無機酸水溶液洗脫，收集含脂肪醇的無機酸水溶液的洗脫液，得洗脫液A；

(2)將步驟(1)中的洗脫液A濃縮，并調節pH至3-5，得濃縮液；

(3)將步驟(2)中的濃縮液上十八烷基鍵合硅膠層析柱、八烷基鍵合硅膠層析柱或圓形微球樹脂層析柱，用pH3-5的無機酸水溶液洗脫，再用含脂肪醇的無機酸水溶液洗脫，收集含脂肪醇的無機酸水溶液的洗脫液，得洗脫液B；

(4)將步驟(3)中的洗脫液B濃縮，即可。

步驟(1)中，所述的棘白菌素B母核的轉化液為本領域常規的棘白菌素B母核的轉化液；較佳的，所述含棘白菌素B母核的轉化液的制備方法包括以下步驟：將培養好的轉化用菌體放入pH為6.0-7.0的磷酸緩沖液懸浮，加入棘白菌素B精制品，混合均勻，25-30℃下轉化反應3-5小時，得到含棘白菌素B母核的轉化液。

步驟(1)中，所述的去除棘白菌素B母核的轉化液中的固體物質的方法為本領域常規的方法，所述的去除棘白菌素B母核的轉化液中的固體物質的方法較佳的為抽濾。

步驟(1)中，較佳的，調節所述的濾液pH至3.5-4.5；更佳的，調節所述的濾液pH至4-4.5。