[發明專利]棘白菌素B母核的提取方法

在審

• 申請號: 201310420360.2
• 申請日: 2013-09-13
• 公開（公告）號: CN104447961A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 李繼安;陳舟舟;史洲洋;沈劍鋒;姚黎棟;石飛燕;林惠敏;陳代杰;周煒祥;韓建棟
• 申請（專利權）人: 浙江震元制藥有限公司;上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/22
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

1.一種棘白菌素B母核的提取方法，其特征在于：所述的提取方法包括以下步驟：(1)去除棘白菌素B母核的轉化液中的固體物質，得濾液，調節濾液pH至3-5，上大孔吸附樹脂，用pH3-5的無機酸水溶液洗脫，再用含脂肪醇的無機酸水溶液洗脫，收集含脂肪醇的無機酸水溶液的洗脫液，得洗脫液A；(2)將步驟(1)中的洗脫液A濃縮，并調節pH至3-5，得濃縮液；(3)將步驟(2)中的濃縮液上十八烷基鍵合硅膠層析柱或八烷基鍵合硅膠層析柱，用pH3-5的無機酸水溶液洗脫，再用含脂肪醇的無機酸水溶液洗脫，收集含脂肪醇的無機酸水溶液的洗脫液，得洗脫液B；(4)將步驟(3)中的洗脫液B濃縮，即可；

步驟(1)中，所述的pH3-5的無機酸水溶液中的無機酸水溶液為鹽酸水溶液、硫酸水溶液或磷酸水溶液中的一種或多種；

步驟(1)中，所述的含脂肪醇的無機酸水溶液中的脂肪醇為乙醇；所述的含脂肪醇的無機酸水溶液中的無機酸水溶液為鹽酸水溶液、硫酸水溶液或磷酸水溶液中的一種或多種；

步驟(3)中，所述的pH3-5的無機酸水溶液中的無機酸水溶液為鹽酸水溶液和/或硫酸水溶液；

步驟(3)中，所述的含脂肪醇的無機酸水溶液中的脂肪醇為甲醇；所述的含脂肪醇的無機酸水溶液中的無機酸水溶液為鹽酸水溶液、硫酸水溶液或磷酸水溶液中的一種或多種。

2.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于：步驟(1)中，所述的去除棘白菌素B母核的轉化液中的固體物質的方法為抽濾；

步驟(1)中，所述的棘白菌素B母核的轉化液的制備方法包括以下步驟：將培養好的轉化用菌體放入pH為6.0-7.0的磷酸緩沖液懸浮，加入棘白菌素B精制品，混合均勻，25-30℃下轉化反應3-5小時，得到含棘白菌素B母核的轉化液；

步驟(1)中，調節所述的濾液pH至3.5-4.5；

步驟(1)中，所述的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯-二乙烯苯型大網格中等極性樹脂；

步驟(1)中，所述的上大孔吸附樹脂的上柱流速為0.5％-2％CV/min；所述的柱體積為大孔吸附樹脂的柱體積。

3.如權利要求2所述的提取方法，其特征在于：步驟(1)中，調節所述的濾液pH至4-4.5。

4.如權利要求2所述的提取方法，其特征在于：步驟(1)中，所述的大孔吸附樹脂為上海華震樹脂公司的HZ806型樹脂、上海華震樹脂公司的HZ-816型樹脂、上海華震樹脂公司的HZ-803型樹脂、羅門哈斯公司的XAD-4型樹脂、羅門哈斯公司的XAD-2型樹脂或羅門哈斯公司的XAD-18型樹脂。

5.如權利要求2所述的提取方法，其特征在于：步驟(1)中，所述的上大孔吸附樹脂的上柱流速為1％CV/min；所述的柱體積為大孔吸附樹脂的柱體積。

6.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于：步驟(1)中，所述的pH3-5的無機酸水溶液的制備方法為：將無機酸與純水混合，并用pH試紙比對，獲得相對應的pH值的無機酸水溶液，即可；

步驟(1)中，所述的pH3-5的無機酸水溶液的用量以大孔吸附樹脂的柱體積計為1-4CV。

7.如權利要求6所述的提取方法，其特征在于：步驟(1)中，所述的pH3-5的無機酸水溶液的用量以大孔吸附樹脂的柱體積計為2-3CV。

8.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于：步驟(1)中，所述的含脂肪醇的無機酸水溶液中的脂肪醇的含量為8％-20％，所述百分比為體積百分比；

步驟(1)中，所述的含脂肪醇的無機酸水溶液中的無機酸水溶液為pH3-5的無機酸水溶液；所述的含脂肪醇的無機酸水溶液中的無機酸水溶液的制備方法為：將無機酸與純水混合，并用pH試紙比對，獲得相對應的pH值的無機酸水溶液，即可；

步驟(1)中，所述的含脂肪醇的無機酸水溶液的用量以大孔吸附樹脂的柱體積計為1-4CV；

步驟(1)中，所述的洗脫的流速為1％-4％CV/min；所述的柱體積為大孔吸附樹脂的柱體積。