[發明專利]α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及應用有效

申請號：	201310414668.6	申請日：	2013-09-12
公開（公告）號：	CN103483223A	公開（公告）日：	2014-01-01
發明（設計）人：	國新華;肖朝輝;劉超;王晟	申請（專利權）人：	吉林大學
主分類號：	C07C255/41	分類號：	C07C255/41;C07C253/30;G01N27/64
代理公司：	長春吉大專利代理有限責任公司 22201	代理人：	張景林;王恩遠
地址：	130012 吉***	國省代碼：	吉林;22
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摘要：
搜索關鍵詞：	氰基羥基肉桂酸正丙酯制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于基質輔助激光解吸電離質譜（MALDI）技術領域，具體涉及α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及在作為MALDI的基質方面的應用。

背景技術

基質輔助激光解吸電離（MALDI）質譜技術自1988年Tanaka等人報道以來，就備受各國研究者的青睞。基質在MALDI分析中充當十分重要的角色，它們不僅能吸收和傳遞激光能量，同時也能將待測物分子分離開防止它們聚集成簇免遭強烈激光照射使待測物分子發生碎裂。一個“好的”基質需要滿足幾個條件，包括其要在所用激光波長處有較強的吸收能力，并且能夠與待測物互溶從而能夠很好的共同均勻結晶。事實上，一種基質可能不同時具備滿足一個樣品中各種各樣的待測物的要求，因此經常使用混合基質即在基質的溶液中加入適當的輔助基質。然而因為缺乏嚴格的指導性規則，在MALDI中找到一種適合作為基質或是輔助基質的化合物是一個需要大量的勞動和時間的工作。幸運的是，近年來在生物樣品MALDI分析中基質添加物或是新基質的研究取得很大進展。

因為每種基質都有其特定的“能力閥值”，而電離不同類型的樣品需要不同的能量。同時，在檢測過程中要保持樣品的穩定性，太“熱”（能量傳遞太高、太快）的基質會導致樣品不可預測的解離，因此在MALDI的使用中，不同類型的樣品要用不同的基質。在選用好適用于待測樣品的基質后便可以使用MALDI?MS進行樣品制備分析，其流程主要包括：（1）選擇適合樣品類型的基質后，將樣品與基質按照適當的比例均勻的混合，一般為混合溶液。（2）用微量移液槍取約0.5ul上述的混合溶液使其自由滴落在靶板上。（3）使液滴自然結晶。（4）打開質譜儀取下靶板，將樣品靶放進質譜儀，此時質譜儀處于高真空工作狀態。（5）待質譜儀顯示準備好后，點擊樣品點的不同位置，用激光照射樣品，產生離子。MALDI產生的離子基本上均帶一個電荷，為準分子離子。

MALDI質譜技術常用的基質，如α-氰基-4-羥基肉桂酸（CHCA）、2,5-二羥基苯甲醛（DHB）和芥子酸（SA）等測試樣品時往往遇到以下問題：（1）質量范圍與樣品類型不廣：CHCA一般只適用于分子量500～10000Da，DHB一般適用于分子量小于5000的多肽，多糖和糖肽；而SA一般適用于分子量大于10000的蛋白。（2）待分析的樣品，尤其是生物樣品如蛋白組學研究的實際樣品，往往存在大量的雜質和其他非蛋白成分，這使得質譜檢測靈敏度大大降低，且嚴重抑制樣品信號，因此需要加入額外的除鹽步驟和除雜質操作，導致樣品大量損失，而低的樣品含量給后續質譜分析和檢測帶來困難。（3）CHCA在合成制備上不易得到純品，商業化產品價格高。因此，開發一些同時具有CHCA、DHB和SA三種傳統基質優良性能，且相對靈敏度更高，應用范圍更廣，易獲取的基質材料是對當前基于MALDI的質譜分析的重要和有力補充，具有良好的實用價值和應用前景。

發明內容

本發明的一個目的是提供α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及在作為MALDI的基質方面的應用。

本發明所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的結構式如式（1）所示：

式（1）

本發明所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的制備方法，其步驟如下：

1）室溫攪拌下，向反應溶劑中加入哌啶，再加入氰基乙酸丙酯（式3）和4-羥基苯甲醛（式2），待藥品溶解后再加入甲苯，升溫回流除水后停止反應，然后冷卻至室溫后，旋蒸得含式（1）產物的濃縮液；

2）產物純化：將所得濃縮液倒入大量去離子水中，立即有固體析出，抽濾得濾餅；再將濾餅用乙醇重結晶1～5次，得微黃色產物，即α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯。

式（2）

式（3）

其中，步驟1）中，

哌啶的加入量為4-羥基苯甲醛摩爾數的1%～10%；

氰基乙酸丙酯與4-羥基苯甲醛的摩爾比為1：0.5～5；