[發明專利]一種組織勻漿法分離活細胞構建細胞庫的方法

有效

• 申請號: 201310413590.6
• 申請日: 2013-09-12
• 公開（公告）號: CN103469309A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 許曉椿;肖海蓉
• 申請（專利權）人: 博雅干細胞科技有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及胎兒附屬物組織細胞庫的構建方法，更具體地說是一種從胎兒附屬物組織分離細胞構建細胞(團)庫的物理方法。

背景技術

胎兒附屬物組織主要由胎盤小葉、胎盤底座、基蛻膜、羊膜和臍帶組織構成。起源于胚胎發育期胚外中胚層的胎盤是由間質、血管及滋養細胞組成，是胎兒最早期的造血器官，含有大量的間質成分。最新的研究表明胎盤中含有間充質干細胞、胎盤亞全能干細胞和豐富的造血干細胞，從胎盤中分離培養出這些多能干細胞將為實驗研究和臨床應用開辟一個嶄新而豐富的來源。

胎盤亞全能干細胞來源于胎盤組織，自胚胎形成的第5到7天開始出現，能分化形成200多種人體組織器官細胞，但不能形成一個完整的人體。具備多能干細胞的許多生物學特征，該細胞體外可向脂肪細胞、成骨細胞、神經細胞、肝上皮樣細胞等定向分化。

胎盤造血干細胞是存在于胎盤組織中的一群原始造血細胞，是血細胞(紅細胞、白細胞、血小板等)的始祖，是高度未分化細胞，也可以說它是一切血細胞(其中大多數是免疫細胞)的原始細胞。胎盤組織中造血干細胞的含量是臍帶血中造血干細胞含量的5-10倍，足可供小孩自用幾次，或提供給1-2個成人患者的治療。同時有效解決了移植時骨髓或動員后外周血來源不足，臍帶血數量不夠等技術難題，將有望取代骨髓、動員后外周血和臍帶血用于造血干細胞移植。

基蛻膜是母親妊娠時胚泡的滋養層細胞一經與子宮內膜接觸，引起其附近的內膜間質細胞肥大增殖形成的組織。基蛻膜形成胎盤隔將叢密絨毛膜分隔成若干個絨毛小葉，其中含有母親源的基蛻膜干細胞。

羊膜(amnion)是覆蓋在羊膜腔內表面的一層薄膜，從細胞滋養層演化而來，是人類兩層胎膜的內層，其厚度為0.02～0.05mm，是人體中最厚的基底膜，由羊膜上皮細胞(human?amniotic?epithelial?cell，HAEC)、基底膜、實質層、纖維母細胞層、海綿層5層結構組成。人羊膜上皮細胞位于羊膜的最內層，羊膜上皮細胞在受精后第8天從外胚葉發育而來，使其可能維持原腸胚形成前期胚胎干細胞的可塑性，在治療中樞神經障礙方面具有獨特的應用價值：1996年，Sakuragawa等最先發現培養的人羊膜上皮細胞表達神經元和神經膠質細胞的標志。隨后的研究表明，培養的人羊膜上皮細胞能合成和釋放神經遞質如乙酰膽堿，兒茶酚胺和多巴胺。人羊膜上皮細胞移植治療大鼠帕金森病(PD)的實驗表明其在體內不僅能存活并表達絡氨酸羥化酶(TH)活性，而且可以逆轉病情和防止神經元死亡。人羊膜上皮細胞對于靈長類的脊髓損傷同樣具有良好的治療效果。

臍帶是胎兒和母體連接的紐帶。臍帶內有三根血管通過，一根靜脈和二根動脈，起著溝通母子間血液循環的作用。足月胎兒的臍帶長約30～70厘米。臍帶華通氏膠(Wharton’s?Jelly)中的干細胞主要是臍帶間充質干細胞。

間充質干細胞(mesenchymal?stem?cell，MSC)是一種多能干細胞，在胚胎發育中來源于中胚層。在機體正常的組織損傷修復過程中，MSC是一種重要的參與組織再生的細胞。在組織損傷引起的特殊信號作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據不同的損傷信號沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴增，體外倍增能力旺盛，即使擴增1億倍仍能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實用的組織修復種子細胞。

MSC具有強大的增殖能力和多向分化潛能，在適宜的體內或體外環境下具有分化為：上皮干細胞、神經干細胞、肝干細胞，肌細胞、成骨細胞、軟骨細胞、基質細胞等多種細胞的能力。可以用來修復受損或病變的組織器官，治療心、腦血管疾病、神經系統疾病、肝臟疾病、骨組織病、角膜損傷、燒傷燙傷、肌病等多種疾病;并且，MSC具有免疫調節作用，通過負性免疫調節功能，抑制機體亢進的免疫反應，使機體免疫功能恢復平衡，從而可以用來治療造血干細胞移植之后的免疫排斥反應以及克隆氏病、紅斑狼瘡，硬皮病等自身免疫系統疾病；MSC還是人體微環境的重要組成部分，移植間充質干細胞可以改變造血微環境，重建免疫系統，促進造血功能恢復，與造血干細胞共移植能顯著提高白血病和難治性貧血等的治療效果。

胎兒附屬物細胞庫的構建，將原來作為醫療廢棄物直接處理掉的新生兒的臍帶和胎盤組織通過處理，提取其中豐富的干細胞資源，并通過成熟的深低溫冷凍技術使之在休眠狀態下長時間儲存，作為一種寶貴的生物資源儲備，將來，可以應用于許多自體重大疾病的治療;同時，也可以用于異體的移植與治療；還可以通過再研發和處理，開發成干細胞藥物，造福全社會。