[發(fā)明專利]一種組織勻漿法分離活細(xì)胞構(gòu)建細(xì)胞庫的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310413590.6
• 申請日: 2013-09-12
• 公開（公告）號: CN103469309A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許曉椿;肖海蓉
• 申請（專利權(quán)）人: 博雅干細(xì)胞科技有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征是由下述步驟組成：

(1)對胎兒附屬物組織提供者進(jìn)行ABO／Rh血型檢測、HLA分型檢測、微生物免疫檢測、用含雙抗的緩沖液去除殘留血液；

(2)組織勻漿前處理：將清洗后的組織剪成小塊，放入組織細(xì)胞處理裝置樣品室中，加入0.5-2倍質(zhì)量的緩沖液或培養(yǎng)基，密封組織細(xì)胞處理裝置；

(3)組織勻漿處理：運(yùn)轉(zhuǎn)組織細(xì)胞處理裝置，在轉(zhuǎn)速為1000-3500rpm，處理時(shí)間為1-15分鐘的條件下，將組織切碎和勻漿，對組織進(jìn)行細(xì)胞(團(tuán))的分離處理；

(4)組織過濾處理：將步驟(3)得到的勻漿液通過100-400目的濾網(wǎng)過濾：對于胎盤小葉和基蛻膜組織、胎盤底座組織，對濾網(wǎng)上殘留的少許胎盤組織塊進(jìn)行研磨，收集濾液；對于臍帶組織、胎盤羊膜組織，收集濾網(wǎng)上的細(xì)胞團(tuán)。

(5)細(xì)胞(團(tuán))收集與清洗：對于細(xì)胞，用離心管收集步驟(4)得到的細(xì)胞懸液，以1400-1800rpm／分鐘的速度離心5-15分鐘，去上清并加入緩沖液重懸細(xì)胞；對于細(xì)胞團(tuán)，用緩沖液清洗后直接收集細(xì)胞團(tuán)。

(6)將步驟(5)分離的細(xì)胞(團(tuán))置液氮保存，按其ABO／Rh分型和HLA分型進(jìn)行保存，建立可供檢索的細(xì)胞信息檔案，即構(gòu)建出細(xì)胞庫。

2.如權(quán)利要求1所述的組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征在于，所述的步驟(1)中，胎兒附屬物組織包括胎盤小葉和基蛻膜、胎盤底座、胎盤羊膜和臍帶。

3.如權(quán)利要求1所述的組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中，所使用的組織細(xì)胞處理裝置為組織勻漿處理器，優(yōu)選發(fā)明人研制的組織細(xì)胞處理器PlacentaPro。

4.如權(quán)利要求1所述的組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中，組織細(xì)胞處理裝置所處理的胎兒附屬物組織樣品的大小為5-300g，其中臍帶組織為5-30g，胎盤小葉和基蛻膜組織為30-120g，胎盤底座組織為100-300g，胎盤羊膜組織為5-25g。

5.如權(quán)利要求1所述的組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中，胎盤小葉和基蛻膜組織處理轉(zhuǎn)速優(yōu)選1000-2400rpm；臍帶組織處理轉(zhuǎn)速優(yōu)選1500-3500rpm；胎盤底座組織處理轉(zhuǎn)速優(yōu)選1500-2500rpm；胎盤羊膜組織處理轉(zhuǎn)速優(yōu)選2000-3000rpm。

6.如權(quán)利要求1所述的組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征在于，所述的步驟(4)中，過濾胎盤小葉和基蛻膜組織、胎盤底座組織時(shí)，優(yōu)選200目的金屬濾網(wǎng)；過濾臍帶組織、胎盤羊膜組織時(shí)，優(yōu)選400目的金屬濾網(wǎng)。

7.如權(quán)利要求1所述的組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征在于，所述的步驟(6)中，細(xì)胞庫可以是臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫、胎盤造血干細(xì)胞庫、胎盤亞全能細(xì)胞庫、基蛻膜干細(xì)胞庫和羊膜上皮細(xì)胞庫。

8.如權(quán)利要求1所述的組織勻漿法分離胎兒附屬物組織構(gòu)建細(xì)胞(團(tuán))庫的方法，其特征在于，所述的步驟(6)中，質(zhì)量控制包括了細(xì)胞來源的調(diào)查；細(xì)胞污染的檢測，如乙肝兩對半、丙肝、艾滋、巨細(xì)胞病毒、EB病毒和梅毒；遺傳病檢測；HLA-ABC／DR配型檢測；細(xì)胞活性的檢測。