[發明專利]一種環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法有效
| 申請號： | 201310413429.9 | 申請日： | 2013-09-12 |
| 公開（公告）號： | CN103789357A | 公開（公告）日： | 2014-05-14 |
| 發明（設計）人： | 董永勝 | 申請（專利權）人： | 齊魯工業大學 |
| 主分類號： | C12P7/22 | 分類號： | C12P7/22;C12R1/09 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 張貴賓 |
| 地址： | 250353 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 環狀 芽孢 桿菌 發酵 生產 乙烯基 愈創木酚 方法 | ||
1.一種環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法，以菌種保藏編號為CGMCC?No.8044的環狀芽孢桿菌（Bacillus?circulans）HG12菌株為生產菌種，其特征為，包括如下步驟：（1）從試管斜面上挑取1-2環環狀芽孢桿菌HG12菌體接種到液體種子培養基中，在35-40℃、120-160r/min條件下，培養12-16h，制得活化后的液體種子；（2）將液體種子按體積比為3-5%的接種量接種到液體發酵培養基中，發酵10-12h，加入木聚糖酶，繼續發酵10-12h，加入阿魏酸酯酶，再發酵60-72h制得含有4-乙烯基愈創木酚的發酵液；（3）將發酵液用微孔濾膜過濾，收集濾出液，向濾出液中加入萃取劑，混合均與，靜置分相，制得含有4-乙烯基愈創木酚的萃取液，將萃取液真空蒸發，制得4-乙烯基愈創木酚產品。
2.根據權利要求1所述的環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法，其特征為，步驟（1）中，液體種子培養基的組分為：葡糖糖10.0g/L，蛋白胨10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，NaCl?5.0g/L，pH?7.0-7.2，蒸餾水定容。
3.根據權利要求1所述的環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法，其特征為，步驟（2）中，液體發酵培養基為：小麥麩皮300g，加水1000mL，混合均勻，于100℃下、蒸煮10-20min，調pH值為6.0-6.5，121℃下、滅菌30min。
4.根據權利要求1所述的環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法，其特征在于：步驟（2）中，菌體的發酵條件為37-40℃、160-200r/min。
5.根據權利要求1所述的環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法，其特征在于：步驟（3）中，微孔濾膜的工作壓力為0.05-0.1MPa，微孔濾膜的孔徑為0.2-0.4μm。
6.根據權利要求1所述的環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法，其特征在于：步驟（3）中，萃取劑為乙酸丁酯，其用量為濾出液體積比的20-30%。
7.根據權利要求3所述的環狀芽孢桿菌發酵生產4-乙烯基愈創木酚的方法，其特征在于：步驟（2）中，木聚糖酶的用量為10.0-20.0U/g麩皮，阿魏酸酯酶的用量為5.0-10.0U/g麩皮。
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