[發(fā)明專利]一種調(diào)控鐵皮石斛懸浮細(xì)胞多糖含量增加的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310412811.8
• 申請日: 2013-09-12
• 公開（公告）號: CN103430852A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇劉花
• 申請（專利權(quán)）人: 南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種調(diào)控鐵皮石斛懸浮細(xì)胞多糖含量增加的方法，其特征在于所述的方法由下列步驟組成：野外生長的鐵皮石斛葉片，在MS培養(yǎng)基上，附加激素NAA?1mg/L，IBA?2mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，誘導(dǎo)愈傷組織，誘導(dǎo)30天，繼代4-5次，繼代周期20天，取繼代后的嫩綠松散的愈傷組織，加入White液體培養(yǎng)基中，附加激素TDZ0.1-0.5mg/l+IAA0.3-1.0mg/l，進(jìn)行鐵皮石斛懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)30天后，在培養(yǎng)基中加入1-3mg/l稀土，進(jìn)行懸浮細(xì)胞和多糖含量的調(diào)控，取樣后采用水提法提取鐵皮石斛多糖含量，提取時間為7.5?h，料液比為1:20，pH為8.5，使用樹脂吸附法對多糖進(jìn)行純化，D₃₀₁R樹脂對鐵皮石斛多糖吸附量大，氯化鈉洗脫效果最好，使用苯酚-硫酸法對純化后的多糖進(jìn)行檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：所述無菌的石斛外植體葉片和芽按照下述方法得到：取野生鐵皮石斛葉片和芽，洗衣粉浸泡3分鐘，流水沖洗1-2小時，經(jīng)酒精消毒處理30s，氯化汞消毒處理8分鐘，無菌水沖洗5遍，用吸水紙吸去無菌外植體表面的水分。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：培養(yǎng)條件溫度25℃，濕度70%，光照2000-4000lx，光期14h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：鐵皮石斛懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)選擇的培養(yǎng)基為White培養(yǎng)基，附加激素TDZ和IAA。

5.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：調(diào)控鐵皮石斛多糖的的稀土優(yōu)選為硝酸鑭。

6.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：在培養(yǎng)基中加入的稀土為過濾滅菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：本發(fā)明采用水提法提取，精密度RSD%為3.12%，重現(xiàn)性RSD%值為1.83%，穩(wěn)定性RSD%值為3.8%。

8.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：本發(fā)明采用D₃₀₁R樹脂對多糖進(jìn)行純化，吸附液25℃，濃度5mg·mL^－1，pH為7.0，吸附流度為1.8mL·min^－1時吸附較強(qiáng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：本發(fā)明采用氯化鈉進(jìn)行洗脫，最佳洗脫濃度0.5mol·L^－1，洗脫率達(dá)89.72%。

10.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于：本發(fā)明采用苯酚-硫酸法對鐵皮石斛多糖進(jìn)行檢測，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，加入1.5mL5%的苯酚溶液，硫酸5mL，顯色溫度80℃，在水浴中加熱30min，在波長488nm下測定鐵皮石斛多糖的含量，此種方法快速、顯色穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、適用于鐵皮石斛多糖含量的測定。