[發明專利]液-質聯用快速檢測瘦肉精含量的方法及樣品前處理方法

有效

• 申請號: 201310412191.8
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103472160A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 嚴華;張朝暉;劉鑫;李建輝;云環;崔鳳云
• 申請（專利權）人: 北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/08
• 分類號: G01N30/08;G01N30/14;G01N30/02
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 彭秀麗

技術領域

本發明屬于食品添加劑檢測領域，具體涉及一種液-質聯用法快速檢測動物源食品中瘦肉精的方法，以及適用的樣品前處理方法。?

背景技術

β-受體激動劑，又稱β-興奮劑（β-agonists），是一類人工合成腎上腺受體激動劑，包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等十幾種化合物。醫學臨床上，β-受體激動劑類化合物能用于防治人、獸支氣管哮喘和支氣管痙攣。然而，β-受體激動劑還是一種蛋白同化制劑，在促進蛋白質合成的同時能夠減少胴體脂肪的合成，從而作為飼料添加劑使用之后能夠有效提高食用動物的瘦肉率、減少食用動物的脂肪、促進動物生長以及縮短動物的生長期，進而能夠帶來更多的經濟效益，故而俗稱為“瘦肉精”。研究發現，長期使用瘦肉精會使其在動物體內蓄積，人類食用含瘦肉精超過安全值的動物肌肉或內臟后，會出現震顫、心悸、精神緊張、頭疼、肌肉疼痛、頭暈、惡心、嘔吐、四肢無力、發燒、戰栗等癥狀，甚至危及生命。1992年，西班牙首次發生多人食用含瘦肉精的畜產品而引發中毒事件；1997年，香港發生多人進食大陸供港豬的內臟而引起瘦肉精中毒事件。此外，上海、廣東等地都曾出現瘦肉精中毒事件。我國農業部1997年發文禁止瘦肉精在飼料和畜牧生產中使用，然而，由于β-受體激動劑類化合物的藥效顯著、價格低廉且能夠產生較好的經濟效益，因此在我國畜牧生產過程中仍存在大量使用瘦肉精的情況。?

中國專利文獻CN101949898A公開了一種動物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測方法。該方法包括以下步驟：（1）樣品提取：稱取均勻試樣，加入乙腈、異丙醇和檸檬酸緩沖溶液并進行渦旋混合提取，離心取上清液后加入異丙醇并以檸檬酸緩沖液潤洗，冷凍離心并濾膜過濾后待用；（2）提取液凈化：將固相萃取柱裝好，依次用甲醇、水和檸檬酸緩沖液活化；取待凈化?提取液低速過柱；合并收集洗脫液，在氮吹濃縮裝置蒸干，并加入含甲酸的水-甲醇溶液振蕩溶解殘渣后，濾膜過濾待用；（3）液相色譜-質譜測定。上述方法中采用乙腈、異丙醇和檸檬酸緩沖溶液渦旋混合提取、親水性聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物和陽離子交換型固相萃取小柱凈化，利用待分析化合物的pKa參數差異，改變淋洗液的pH值，從而實現對不同種類堿性藥物的同時凈化，之后采用液相色譜-質譜測定來檢測豬肉、豬肝、雞蛋、蝦、牛奶等動物源性食品中多種堿性藥物如β-受體激動劑類化合物、磺胺類、苯二氮卓類、硝基咪唑類、苯并咪唑類、三苯甲烷類的殘留量，測定結果具有較高的準確性和可靠性。然而，該方法的前處理試劑消耗量大，且提取液為乙腈和檸檬酸緩沖液的混合溶液，旋轉濃縮耗時較長，處理單個樣品需要4-5h，凈化過程采用兩根固相萃取小柱，成本較高。因此，亟需開發出一種新的適用于動物源食品中β-受體激動劑快速檢測的樣品前處理方法，尤其是適用于液-質聯用檢測的高效靈敏的樣品前處理的方法。?

發明內容

本發明所要解決的問題在于現有技術中對動物源食品中β-受體激動劑進行檢測時采用的樣品前處理方法耗時長、試劑消耗量大，進而提供一種適用于同時、快速檢測動物源食品中15種β-受體激動劑類化合物的樣品前處理方法，尤其是適用于液-質聯用檢測的樣品前處理方法；?

本發明所要解決的第二個技術問題在于提供一種能夠快速檢測出動物源食品中β-受體激動劑的方法。?

為解決上述技術問題，本發明是通過以下技術方案實現的：?

本發明提供一種液-質聯用快速檢測瘦肉精含量的樣品前處理方法，其包括下列步驟：?

（1）取待檢測樣品，順序加入足量或過量水和有機提取液對所述待測樣品含有的β-受體激動劑進行提取；?

（2）向提取后的混合液中加入除水劑和鹽析劑并混合均勻，離心分層后，收集上層有機提取液得第一上清液；?

（3）在所述第一上清液中加入吸附劑進行凈化，離心得第二上清液；?

（4）將所述第二上清液經濃縮、復溶、過濾步驟，得到所需的待測樣液。?

所述步驟（1）中，所述有機提取液為乙腈或酸化乙腈，作為可選擇的實施方式，所述酸化乙腈為乙酸酸化乙腈，通過將1mL乙酸加入到99mL乙腈中配制而成。?

所述步驟（1）中，所述水、所述有機提取液與所述動物源食品樣品的質量比為1:3:1-3:5:1。?