[發(fā)明專(zhuān)利]一種發(fā)光細(xì)菌凍干制劑及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310411157.9
• 申請(qǐng)日: 2013-09-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104419644B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾立波;陳連康;張玉榮;丁國(guó)榮;王菁
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海市刑事科學(xué)技術(shù)研究院;上海安力康科學(xué)儀器有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/04
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/04;C12Q1/02
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;劉真真

本發(fā)明公開(kāi)了一種發(fā)光細(xì)菌凍干制劑的制備方法，具體地，包括步驟：a.提供一含發(fā)光細(xì)菌和保護(hù)劑的液態(tài)混合物；b.將所述的混合物降溫至第一溫度區(qū)間T1并在第一溫度區(qū)間維持一段時(shí)間P1；c.將所述降溫后的混合物從第一溫度區(qū)間T1升溫至第二溫度區(qū)間T2，并在第二溫度區(qū)間維持一段時(shí)間P2；d.將所述的升溫后的混合物升溫從第二溫度區(qū)間上升至第三溫度區(qū)間T3,并維持一段時(shí)間P3；和e.將所述的休眠混合物進(jìn)行干燥，從而形成發(fā)光細(xì)菌的凍干制劑。本發(fā)明方法制備的發(fā)光細(xì)菌凍干制劑穩(wěn)定性高，復(fù)蘇后的活性有效時(shí)間長(zhǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物制劑領(lǐng)域，具體地，涉及發(fā)光細(xì)菌尤其是青海弧菌(Vibrioqinghaiensis)的凍干制劑領(lǐng)域。

背景技術(shù)

利用發(fā)光細(xì)菌對(duì)于毒物的敏感性，進(jìn)行測(cè)試和評(píng)價(jià)環(huán)境或食品的綜合急性毒性已成為越來(lái)越常用的監(jiān)測(cè)方法。

在利用發(fā)光細(xì)菌測(cè)試毒物毒性的技術(shù)測(cè)試和評(píng)價(jià)環(huán)境或食品的綜合急性毒性過(guò)程中，通常使用發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液或發(fā)光細(xì)菌冷凍干燥試劑。

發(fā)光細(xì)菌的培養(yǎng)液與冷凍干燥試劑相比，培養(yǎng)液使用復(fù)雜，需要先將發(fā)光細(xì)菌進(jìn)行固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程往往需要反復(fù)操作多次，發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液穩(wěn)定性和一致性差，對(duì)培養(yǎng)時(shí)間和環(huán)境以及專(zhuān)業(yè)人員要求高。

目前，發(fā)光細(xì)菌凍干制劑相比培養(yǎng)液而言，雖然具有攜帶方便、操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，但由于復(fù)蘇后的凍干細(xì)菌有效性保持時(shí)間較短，僅1小時(shí)左右，并不能滿足長(zhǎng)時(shí)間的測(cè)試需求。

因此，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)一種穩(wěn)定性高且能在復(fù)蘇后長(zhǎng)時(shí)間有效的凍干制劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種發(fā)光細(xì)菌凍干制劑及其制備方法，以及一種包括本發(fā)明發(fā)光細(xì)菌凍干制劑的試劑盒。

本發(fā)明的第一方面，提供了發(fā)光細(xì)菌凍干制劑的制備方法，包括步驟：

a.提供一含發(fā)光細(xì)菌和保護(hù)劑的液態(tài)混合物；

b.將所述的混合物降溫至第一溫度區(qū)間T1并在第一溫度區(qū)間維持一段時(shí)間P1，從而形成降溫后的混合物，其中所述的第一溫度區(qū)間T1為-100～-60℃，更佳地為-90～-70℃；P1為0.2～10小時(shí)，較佳地，為0.5～8小時(shí)，更佳地，為1～4小時(shí)；

c.將所述降溫后的混合物從第一溫度區(qū)間T1升溫至第二溫度區(qū)間T2，并在第二溫度區(qū)間維持一段時(shí)間P2，從而形成升溫后混合物，所述的第二溫度區(qū)間T2為-55～-30℃，更佳地為-40～-35℃；P2為0.2～24小時(shí)，更佳地，為0.5～10小時(shí)；

d.將所述的升溫后的混合物升溫從第二溫度區(qū)間上升至第三溫度區(qū)間T3,并維持一段時(shí)間P3，從而形成休眠混合物，所述的第三溫度區(qū)間T3為-5～0℃，且P3為1～72小時(shí)，更佳地，維持5～24小時(shí)；和

e.將所述的休眠混合物進(jìn)行干燥，從而形成發(fā)光細(xì)菌的凍干制劑。

在另一優(yōu)選例中，在步驟b中，所述的降溫是將0～40℃液態(tài)混合物降至第一溫度區(qū)間T1。

在另一優(yōu)選例中，在步驟b中，所述的降溫速率為1-5℃/min。

在另一優(yōu)選例中，在步驟b中，所述的降溫時(shí)間為0.25－2小時(shí)。

在另一優(yōu)選例中，步驟d中還包括步驟：將所述升溫后的混合物分階段升溫至所述的第三溫度區(qū)間T3。

在另一優(yōu)選例中，所述的分階段包括分為一階段、兩階段或三階段。

在另一優(yōu)選例中，包括將所述的混合物升溫至一個(gè)或多個(gè)亞溫度區(qū)間S，所述的亞溫度區(qū)間選自下組：-25±2℃、-20±2℃、-15±2℃、-10±2℃。

在另一優(yōu)選例中，在各亞溫度區(qū)間的維持時(shí)間Ps為5～60min，更佳地，為10～30min。