[發明專利]一種發光細菌凍干制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201310411157.9
• 申請日: 2013-09-10
• 公開（公告）號: CN104419644B
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 曾立波;陳連康;張玉榮;丁國榮;王菁
• 申請（專利權）人: 上海市刑事科學技術研究院;上海安力康科學儀器有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12Q1/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;劉真真

本發明公開了一種發光細菌凍干制劑的制備方法，具體地，包括步驟：a.提供一含發光細菌和保護劑的液態混合物；b.將所述的混合物降溫至第一溫度區間T1并在第一溫度區間維持一段時間P1；c.將所述降溫后的混合物從第一溫度區間T1升溫至第二溫度區間T2，并在第二溫度區間維持一段時間P2；d.將所述的升溫后的混合物升溫從第二溫度區間上升至第三溫度區間T3,并維持一段時間P3；和e.將所述的休眠混合物進行干燥，從而形成發光細菌的凍干制劑。本發明方法制備的發光細菌凍干制劑穩定性高，復蘇后的活性有效時間長。

技術領域

本發明涉及微生物制劑領域，具體地，涉及發光細菌尤其是青海弧菌(Vibrioqinghaiensis)的凍干制劑領域。

背景技術

利用發光細菌對于毒物的敏感性，進行測試和評價環境或食品的綜合急性毒性已成為越來越常用的監測方法。

在利用發光細菌測試毒物毒性的技術測試和評價環境或食品的綜合急性毒性過程中，通常使用發光細菌培養液或發光細菌冷凍干燥試劑。

發光細菌的培養液與冷凍干燥試劑相比，培養液使用復雜，需要先將發光細菌進行固體斜面培養基培養，培養過程往往需要反復操作多次，發光細菌培養液穩定性和一致性差，對培養時間和環境以及專業人員要求高。

目前，發光細菌凍干制劑相比培養液而言，雖然具有攜帶方便、操作簡單的優點，但由于復蘇后的凍干細菌有效性保持時間較短，僅1小時左右，并不能滿足長時間的測試需求。

因此，本領域迫切需要開發一種穩定性高且能在復蘇后長時間有效的凍干制劑。

發明內容

本發明提供了一種發光細菌凍干制劑及其制備方法，以及一種包括本發明發光細菌凍干制劑的試劑盒。

本發明的第一方面，提供了發光細菌凍干制劑的制備方法，包括步驟：

a.提供一含發光細菌和保護劑的液態混合物；

b.將所述的混合物降溫至第一溫度區間T1并在第一溫度區間維持一段時間P1，從而形成降溫后的混合物，其中所述的第一溫度區間T1為-100～-60℃，更佳地為-90～-70℃；P1為0.2～10小時，較佳地，為0.5～8小時，更佳地，為1～4小時；

c.將所述降溫后的混合物從第一溫度區間T1升溫至第二溫度區間T2，并在第二溫度區間維持一段時間P2，從而形成升溫后混合物，所述的第二溫度區間T2為-55～-30℃，更佳地為-40～-35℃；P2為0.2～24小時，更佳地，為0.5～10小時；

d.將所述的升溫后的混合物升溫從第二溫度區間上升至第三溫度區間T3,并維持一段時間P3，從而形成休眠混合物，所述的第三溫度區間T3為-5～0℃，且P3為1～72小時，更佳地，維持5～24小時；和

e.將所述的休眠混合物進行干燥，從而形成發光細菌的凍干制劑。

在另一優選例中，在步驟b中，所述的降溫是將0～40℃液態混合物降至第一溫度區間T1。

在另一優選例中，在步驟b中，所述的降溫速率為1-5℃/min。

在另一優選例中，在步驟b中，所述的降溫時間為0.25－2小時。

在另一優選例中，步驟d中還包括步驟：將所述升溫后的混合物分階段升溫至所述的第三溫度區間T3。

在另一優選例中，所述的分階段包括分為一階段、兩階段或三階段。

在另一優選例中，包括將所述的混合物升溫至一個或多個亞溫度區間S，所述的亞溫度區間選自下組：-25±2℃、-20±2℃、-15±2℃、-10±2℃。

在另一優選例中，在各亞溫度區間的維持時間Ps為5～60min，更佳地，為10～30min。