[發明專利]一種發光細菌凍干制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201310411157.9
• 申請日: 2013-09-10
• 公開（公告）號: CN104419644B
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 曾立波;陳連康;張玉榮;丁國榮;王菁
• 申請（專利權）人: 上海市刑事科學技術研究院;上海安力康科學儀器有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12Q1/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;劉真真

1.一種發光細菌凍干制劑的制備方法，其特征在于，包括步驟：

a.提供一含發光細菌和保護劑的液態混合物；

b.將所述的混合物降溫至第一溫度區間T1并在第一溫度區間維持一段時間P1，從而形成降溫后的混合物，其中所述的第一溫度區間T1為-100～-60℃；P1為0.2～10小時；

c.將所述降溫后的混合物從第一溫度區間T1升溫至第二溫度區間T2，并在第二溫度區間維持一段時間P2，從而形成升溫后混合物，所述的第二溫度區間T2為-55～-30℃；P2為0.2～24小時；

d.將所述的升溫后的混合物升溫從第二溫度區間分階段上升至第三溫度區間T3并維持一段時間P3，從而形成休眠混合物，所述的第三溫度區間T3為-5～0℃，且P3為1～72小時；其中所述分階段包括兩階段或三階段，每階段將所述的混合物升溫至一個或多個亞溫度區間S，所述的亞溫度區間選自下組：-25±2℃、-20±2℃、-15±2℃、-10±2℃，升溫速率為2-10℃/min，在各亞溫度區間的維持時間為5-60min；和

e.將所述的休眠混合物進行干燥，從而形成發光細菌的凍干制劑；

其中，步驟a中所述的保護劑包括奶粉、海藻糖。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的降溫速率為1-5℃/min。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟b中，所述的降溫時間為0.25－2小時。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟b中，所述的降溫是將0～40℃液態混合物降至第一溫度區間T1。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的分階段為兩階段，每階段維持時間為15分鐘。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述升溫的速率為3-8℃/min。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還具有選自下組的一個或多個特征：

從第一溫度區間T1升溫至第二溫度區間T2的升溫速率為1-6℃/min；

從第一溫度區間T1升溫至第二溫度區間T2的升溫時間為5-30分鐘；

從第二溫度區間T2升溫至第三溫度區間T3的升溫速率為1-6℃/min；

從第二溫度區間T2升溫至第三溫度區間T3的升溫時間為5-30分鐘。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的發光細菌是選自以下屬的發光細菌：弧菌屬(Vibrio)、發光桿菌屬(Photobacterium)、光桿菌屬(Photorhabdus)。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的發光細菌是青海弧菌或其衍生菌。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟e中，所述的干燥為真空干燥。

11.一種發光細菌的凍干制劑，其特征在于，所述的凍干制劑由權利要求1-10任一所述的方法制備獲得，且經復蘇后，發光細菌的存活半衰期T_1/2≥6小時,且所述發光細菌凍干制劑精密度cv值小于10％。

12.一種發光細菌的凍干制劑，其特征在于，所述的凍干制劑由權利要求1-10任一所述的方法制備獲得，且發光細菌的發光計數值在40萬光子數以上,且所述發光細菌凍干制劑精密度cv值小于10％，且經復蘇后，發光細菌的存活半衰期T_1/2≥6小時。

13.一種試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括容器以及位于所述容器中的權利要求11或12所述的凍干制劑。