[發(fā)明專利]聾病易感基因SLC26A4 2168A＞G、IVS7-2A＞G突變檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310410838.3
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103451301A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 步迅;夏子芳;劉艷艷;張全芳;韓逸;張懿;謝建珍
• 申請（專利權(quán)）人: 步迅;夏子芳
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及聾病易感基因SLC26A42168A>G、IVS7-2A>G突變檢測試劑盒，屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

世界范圍內(nèi)對聽力語言殘疾者進(jìn)行的致病因素研究表明，約60-80％患者的病因與遺傳因素有關(guān)，其中發(fā)達(dá)國家的臨床研究數(shù)據(jù)表明，遺傳性耳聾在耳聾患者中約占80％。因此近十幾年來，遺傳性耳聾的發(fā)病機(jī)制及其分子流行病學(xué)的研究成為了聾病研究最重要的內(nèi)容之一。隨著人類基因組計(jì)劃完成，聾病基因的定位和克隆取得了巨大的進(jìn)步，聾病的分子遺傳學(xué)研究和分子流行病學(xué)的數(shù)據(jù)使研究者們逐步認(rèn)識(shí)到聾病易感基因突變在維護(hù)聽力健康和發(fā)現(xiàn)聽力異常中的重要性。?

在目前已經(jīng)定位和克隆的耳聾相關(guān)基因中，SLC26A4基因與弧立的大前庭水管綜合征及Pendred綜合征(前庭水管擴(kuò)大或伴內(nèi)耳畸形、神經(jīng)性聾和甲狀腺腫)的關(guān)系密切，臨床上表現(xiàn)為先天性或后天性耳聾，耳聾發(fā)生或加重與外傷、感冒有關(guān)。在95例單一患者前庭水管擴(kuò)大家系的患者中，97.9％(93／95)的具有SLC26A4基因的突變，在發(fā)現(xiàn)的38種突變類型中，IVS7-2A>G、2168A>G在中國前庭水管擴(kuò)大患者SLC26A4基因突變中占有較高的比例。這些染色體突變的基因分型結(jié)果對于分析病情的嚴(yán)重性和指導(dǎo)生育遺傳有非常重要的指導(dǎo)意義。?

目前常用的基因檢測方法有：直接測序(direct?sequencing,DS)、連接酶檢測反應(yīng)(ligase?detection?reaction,LDR)、限制性片段長度多態(tài)性分析(restriction?fragment?length?polymorphism，RFLP)、變性高效液相色譜分析(denaturing?high?performance?liquid?chromotography，DHPLC)、基因芯片。這些方法都存在不同的缺陷，例如操作繁瑣、結(jié)果不易判讀、重復(fù)性差、假陰性假陽性多等問題。對于染色體突變的基因分型，一般的熒光定量試劑盒往往需要對同一個(gè)標(biāo)本進(jìn)行多管檢測，才能獲得2個(gè)以上的分型信息。?

本發(fā)明以上述2個(gè)聾病易感基因位點(diǎn)為檢測對象，通過上述耳聾易感基因位點(diǎn)的擴(kuò)增和熒光定量檢測，與基因分型標(biāo)準(zhǔn)品的對比，即可篩選出含有上述位點(diǎn)突變的個(gè)體，同時(shí)確定基因型。對聾病易感基因的檢測，尤其是對新生兒耳聾基因的篩查具有重要意義；首次利用四通道／四色染料-熒光定量PCR檢測的方法實(shí)現(xiàn)了2位點(diǎn)分型檢測的目標(biāo)，并含有內(nèi)對照以監(jiān)控檢測過程。閉管檢測防止了開蓋檢測操作而產(chǎn)生的污染，為臨床診斷和相關(guān)領(lǐng)域科研提供可靠方法。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種可在1個(gè)小時(shí)內(nèi)同時(shí)檢測聾病易感基因SLC26A42168A>G、IVS7-2A>G突變，區(qū)分基因型并含有內(nèi)對照以監(jiān)控檢測過程。?

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，采取的技術(shù)方案：一種聾病易感基因SLC26A42168A>G、IVS7-2A>G突變檢測試劑盒，該試劑盒包括擴(kuò)增試劑和一系列標(biāo)準(zhǔn)品；?

所述擴(kuò)增試劑包括：PCR緩沖液、MgCl₂和dNTPs的反應(yīng)混合物，Taq酶，超純水，高特異性擴(kuò)增SLC26A4：2168A>G、IVS7-2A>G的引物混合物，對上述位點(diǎn)進(jìn)行特異性檢測的探針混合物，對人基因組DNA進(jìn)行檢測的通用探針混合物，內(nèi)對照及對內(nèi)對照進(jìn)行檢測的引物探針混合物；?

所述一系列標(biāo)準(zhǔn)品包括：2168A>G分型標(biāo)準(zhǔn)品(10ng／uL的2168A>G雜合型突變DNA標(biāo)本1管)、IVS7-2A>G分型標(biāo)準(zhǔn)品(10ng／uL的IVS7-2A>G雜合型突變DNA標(biāo)本1管)。?

所述用于對SLC26A4：2168A>G、IVS7-2A>G突變進(jìn)行特異性檢測的探針，對人基因組DNA進(jìn)行檢測的通用探針，對內(nèi)對照進(jìn)行檢測的探針被分為四組，分別采用四種不同的發(fā)光基團(tuán)對各組探針的5’端進(jìn)行標(biāo)記，3’端的淬滅基團(tuán)可以為相同或不同的熒光染料。?

所述探針?biāo)譃榈乃慕M為：用于對SLC26A4：IVS7-2A>G突變進(jìn)行特異性檢測的探針采用同一組發(fā)光-淬滅基團(tuán)；用于對2168A>G突變進(jìn)行特異性檢測的探針采用同一組發(fā)光-淬滅基團(tuán)；對人基因組DNA進(jìn)行檢測的通用探針采用同一組發(fā)光-淬滅基團(tuán)；用于對內(nèi)對照進(jìn)行特異性檢測的探針采用同一組發(fā)光-淬滅基團(tuán)。?