[發明專利]聾病易感基因SLC26A4 2168A＞G、IVS7-2A＞G突變檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310410838.3
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103451301A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 步迅;夏子芳;劉艷艷;張全芳;韓逸;張懿;謝建珍
• 申請（專利權）人: 步迅;夏子芳
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.聾病易感基因SLC26A42168A>G、IVS7-2A>G突變檢測試劑盒，其特征在于包括擴增試劑和一系列標準品；所述擴增試劑包括：PCR緩沖液、MgCl₂和dNTPs的反應混合物，Taq酶，超純水，高特異性擴增SLC26A4：2168A>G、IVS7-2A>G引物混合物，對上述位點進行特異性檢測的探針混合物，對人基因組DNA進行檢測的通用探針混合物，內對照及對內對照進行檢測的引物探針混合物；所述一系列標準品包括：2168A>G分型標準品、IVS7-2A>G分型標準品。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

用于SLC26A4：IVS7-2A>G檢測的引物為：

SEQ?NO.1：5’-TGGGATGGATTTAACAATGCC-3’

SEQ?NO.2：5’-GTTAGAAAGTTCAGCATTATTTGGTTG-3’；

用于SLC26A4：2168A>G檢測的引物為：

SEQ?NO.3：5’-AATGGAACCTTGACCCTCTTGA-3’

SEQ?NO.4：5’-TGTGATAGAAAAGCTGGAGCAATG-3’；

用于SLC26A4：IVS7-2A>G突變檢測的探針為：

SEQ?NO.5：5’-AAATGGCAGTAGCAATTATCGTCCGA-3’

用于SLC26A4：2168A>G突變檢測的探針為：

SEQ?NO.6：5’-CTTGGTTCTGTAGATAGAGTATAGCATCACGGC-3’；

用于對人基因組DNA進行檢測的通用探針為：

SEQ?NO.7：5’-GAATGTGTCCTTTCTAATGTTGTCGTC-3’；

其中LNA核苷以黑體字表示。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述的內對照為一段人工合成的序列裝載到pMD18-T的質粒載體上得到，這段人工合成的序列(SEQ?NO.4)經過NCBI網站Blast沒有找到高相關的同源區。擴增序列及對內對照進行檢測的引物探針為：

SEQ?NO.8：CACCAGCATCTCCCTTCATGTTGACTACCGTAGGCTGCCACCATTTCAGAAGAACGATGACCCCTTGCTAGCAGTGGAAGAGTTGCATGAAGGTAATATACTCGATCCGTAATTCCACTATTGAAATGGGTACATGACTGATACAGACCATC

SEQ?NO.9：5’-CACCAGCATCTCCCTTCATGT-3’

SEQ?NO.10：5’-GATGGTCTGTATCAGTCATGTACCCA-3’

SEQ?NO.11：5’-GAACGATGACCCCTTGCTAGCAGTGGAAGAG-3’

4.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述的用于SLC26A4：2168A>G、IVS7-2A>G突變檢測的探針，對人基因組DNA進行檢測的通用探針，內對照探針，每條探針的5’端和3’端均進行熒光染料標記，5’端為發光基團和3’端為淬滅基團。

5.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述用于對SLC26A4：2168A>G、IVS7-2A>G突變進行特異性檢測的探針，對人基因組DNA進行檢測的通用探針被分為四組，分別采用四種不同的發光基團對各組探針的5’端進行標記，3’端的淬滅基團可以為相同或不同的熒光染料。

6.根據權利4要求所述的試劑盒，其特征在于：探針所分為的四組為：用于對SLC26A4：IVS7-2A>G突變進行特異性檢測的探針采用同一組發光-淬滅基團；用于對2168A>G突變進行特異性檢測的探針采用同一組發光-淬滅基團；對人基因組DNA進行檢測的通用探針采用同一組發光-淬滅基團；用于對內對照進行特異性檢測的探針采用同一組發光-淬滅基團。