[發明專利]6聾病易感基因位點分型/突變比例檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310410781.7
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103436625A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 步迅;夏子芳;劉艷艷;張全芳
• 申請（專利權）人: 步迅;夏子芳
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及6聾病易感基因位點分型／突變比例檢測試劑盒，屬于生物檢測技術領域。

背景技術

世界范圍內對聽力語言殘疾者進行的致病因素研究表明，約60-80％患者的病因與遺傳因素有關，其中發達國家的臨床研究數據表明，遺傳性耳聾在耳聾患者中約占80％。因此近十幾年來，遺傳性耳聾的發病機制及其分子流行病學的研究成為了聾病研究最重要的內容之一。隨著人類基因組計劃完成，聾病基因的定位和克隆取得了巨大的進步，聾病的分子遺傳學研究和分子流行病學的數據使研究者們逐步認識到聾病易感基因突變在維護聽力健康和發現聽力異常中的重要性。

在目前已經定位和克隆的耳聾相關基因中，GJB2是最常見的易感基因，在先天性重度耳聾患者中約占30-50％。目前，在該基因已經發現了100多種突變類型，在中國常見的突變形式為235delC，其在所有致病性突變中約占74.14％，約22.2％的中國耳聾患者與該突變有關。另外GJB2299_300delAT的突變等位基因頻率約為3％。SLC26A4基因與弧立的大前庭水管綜合征及Pendred綜合征(前庭水管擴大或伴內耳畸形、神經性聾和甲狀腺腫)的關系密切，臨床上表現為先天性或后天性耳聾，耳聾發生或加重與外傷、感冒有關。在95例單一患者前庭水管擴大家系的患者中，97.9％(93／95)的具有SLC26A4基因的突變，在發現的38種突變類型中，IVS7-2A>G、2168A>G在中國前庭水管擴大患者SLC26A4基因突變中占有較高的比例。這些染色體突變的基因分型結果對于分析病情的嚴重性和指導生育遺傳有非常重要的指導意義。

藥物的耳毒性是導致語前聽力損失的一個重要因素，部分與線粒體12S?rRNA基因1555A>G突變有關，該突變可以增加耳蝸對氨基糖甙類藥物的敏感性。在美國，耳毒性藥物相關的聽力損失患者中，10％的具有12S?rRNA基因1555A>G突變，美國語前聽力損失患者中，1555A>G突變患者的發病率約為1／20000-1／40000。在西班牙，12S?rRNA基因1555A>G突變與15-20％的家族性非綜合征型聽力損失有關，許多年老的家族成員即使沒有使用氨基糖甙類藥物也可發生因此突變導致的聽力下降。而在中國，藥物性耳聾的發病率超出了原有的想象，在一系列的文章報道中，發現在門診發現的耳聾患者中，約5％的患者是由于12S?rRNA基因1555A>G突變導致的，而在聾啞學校這樣一個特殊群體，則高達12％的患者是由于12S?rRNA基因1555A>G突變接觸氨基糖甙類藥物而致聾。同時在中國群體中還發現了12S?rRNA基因1494C>T突變與藥物性耳聾的關系，目前至少已經發現了三個大的家系是由于1494C>T突變導致的。1555A>G突變和1494C>T突變者在出生時往往聽力正常，很難通過聽力篩查而被提前發現和預測，卻存在因耳毒性藥物的使用而發生聽力損失的隱患。由于線粒體的異質性特征，不同的個體表現出的線粒體突變的比例不同。大量研究表明，1555A>G和1494C>T突變線粒體所占有的比例高低與病情存在一定的相關性，通常突變線粒體所占比例高的個體表現出重度耳聾，而占比低的則表現出輕度耳聾或正常。但是即使突變占比很低，仍存在藥物致聾的危險。因此，一方面需要能夠分辨出突變比例的試劑盒來為線粒體聾病相關突變提供更方便的研究手段，另一方面要求這些試劑能夠對低突變比例標本有很好的檢出能力。

目前常用的基因檢測方法有：直接測序(direct?sequencing,DS)、連接酶檢測反應(1igase?detection?reaction,LDR)、限制性片段長度多態性分析(restriction?fragment?length?polymorphism，RFLP)、變性高效液相色譜分析(denaturing?high?performance?liquid?chromotography，DHPLC)、基因芯片。這些方法都存在不同的缺陷，例如操作繁瑣、結果不易判讀、重復性差、假陰性假陽性多等問題。對于染色體突變的基因分型，一般的熒光定量試劑盒往往需要對同一個標本進行多管檢測，才能獲得2個以上的分型信息。對于線粒體DNA的突變比例檢測，質譜法能檢出5％左右的突變，而測序和基因芯片對于突變線粒體的選擇能力只能達到20％左右，難以分辨出更低突變比例的標本。