[發明專利]CAPE在體外培養造血干/祖細胞中的用途

有效

• 申請號: 201310404418.4
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103484428A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 裴雪濤;李艷華;劉一鳴;張博文;張靜;王思涵;何麗娟;姚海雷
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/0783;C12N5/0789;C12M3/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術領域

本發明涉及造血干/祖細胞體外培養領域。具體地，本發明涉及CAPE在體外培養造血干/祖細胞中的用途、細胞培養基及其在體外培養造血干/祖細胞中的用途、用于體外培養造血干/祖細胞的試劑盒及其用途、體外培養造血干/祖細胞的方法、造血干/祖細胞或其衍生物、體外培養造血干/祖細胞的系統。

背景技術

造血干/祖細胞（Hematopoietic?stem?cells，HSC）可分化形成所有類型的血液細胞，并具有自我更新能力，因而造血干/祖細胞移植是治療多種血液系統疾病最為安全有效的方法，而其分化產生的各種血細胞（紅細胞、白細胞、血小板等）也廣泛應用臨床治療。然而，目前臨床造血干/祖細胞的來源主要是骨髓及動員的外周血等，其采集數量十分有限，也會對供者產生一定的傷害。臍帶血富含造血干/祖細胞，其應用可以避免傷害供者，但由臍帶血獲得的造血干/祖細胞數量仍然較為稀少。因此，對臍帶血造血干/祖細胞進行擴增具有重要臨床應用價值，若能增加造血干/祖細胞數量，便可使其發揮更強的體內造血重建功能。

目前體外培養造血干/祖細胞主要是通過添加細胞因子，較為常見的細胞因子有白介素3（IL-3）、白介素6（IL-6）、血小板生成素（TPO）、干細胞因子（SCF）、胰島素樣生長因子結合蛋白2（IGF-BP2）和人FMS樣酪氨酸激酶3配體（Flt-3L）等。通過添加細胞因子進行造血干細胞體外培養雖然可以實現一定規模的擴增，但在擴增的同時造血干/祖細胞分化較為嚴重，降低了其應用研究價值；此外，細胞因子十分昂貴，并且結構功能不夠穩定，導致無法實現造血干/祖細胞體外大規模擴增。

因此，目前的造血干/祖細胞體外培養的方法仍有待改進。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種體外培養造血干/祖細胞的手段。

發明人研究發現，CAPE（即咖啡酸苯乙酯）能夠上調血紅素加氧酶1（HO-1）和SCF的表達，上調促進造血干/祖細胞擴增的相關基因表達。在造血干/祖細胞體外擴增體系中添加一定濃度的CAPE，能夠顯著提高擴增后的人臍血單個核細胞及CD34陽性細胞中造血干/祖細胞的比例、造血干/祖細胞的數量和集落形成能力，提高造血干/祖細胞的體外擴增效率。同時，CAPE為小分子化合物，具有穩定的結構功能，并且價格低廉、無異源污染，適合用于造血干/祖細胞體外大規模擴增。

因此，根據本發明的一個方面，本發明提供了CAPE在體外培養造血干/祖細胞中的用途。根據本發明的實施例，在造血干/祖細胞體外擴增體系中添加一定濃度的CAPE，擴增后的人臍血單個核細胞及CD34陽性細胞中造血干/祖細胞的比例明顯增加，總集落數量顯著提高，由此，CAPE可以有效促進造血干/祖細胞的體外擴增，提高造血干/祖細胞的體外擴增效率。

根據本發明的另一方面，本發明提供了一種細胞培養基。根據本發明的實施例，該細胞培養基包含：基礎培養基，該基礎培養基為無血清Stemspan培養基或Stemline?II培養基；IL-3；IL-6；TPO；SCF；Flt-3L以及CAPE。發明人發現，利用本發明的細胞培養基對分離的人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞進行體外培養，能夠有效地促進人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞的擴增，提高擴增后的人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞中造血干/祖細胞的比例和總集落數量，從而能夠有效地提高造血干/祖細胞的擴增效率，獲得干細胞性能良好的造血干/祖細胞或其衍生物。

根據本發明的又一方面，本發明提供了一種用于體外培養造血干/祖細胞的試劑盒。根據本發明的實施例，該試劑盒中含有CAPE。發明人發現，利用本發明的用于體外培養造血干/祖細胞的試劑盒對分離的人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞進行體外培養，人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞能夠有效擴增，擴增后的人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞中造血干/祖細胞的比例顯著提高，總集落數量明顯增多，造血干/祖細胞的擴增效率顯著提高。

根據本發明的再一方面，本發明提供了一種用于體外培養造血干/祖細胞的試劑盒。根據本發明的實施例，該試劑盒包括本發明前面所述的培養基。根據本發明的實施例，利用本發明的用于體外培養造血干/祖細胞的試劑盒對分離的人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞進行體外培養，能夠有效地促進人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞的擴增，提高擴增后的人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞中造血干/祖細胞的比例和總集落數量，從而能夠有效地提高造血干/祖細胞的擴增效率，獲得干細胞性能良好的造血干/祖細胞或其衍生物。