[發(fā)明專利]CAPE在體外培養(yǎng)造血干/祖細胞中的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310404418.4
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103484428A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 裴雪濤;李艷華;劉一鳴;張博文;張靜;王思涵;何麗娟;姚海雷
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/0783;C12N5/0789;C12M3/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.CAPE在體外培養(yǎng)造血干/祖細胞中的用途。

2.一種細胞培養(yǎng)基，其特征在于，包含：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為無血清Stemspan培養(yǎng)基或Stemline?II培養(yǎng)基；

IL-3；

IL-6；

TPO；

SCF；

Flt-3L；以及

CAPE。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述IL-3的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選10ng/mL，

任選地，所述IL-6的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選20ng/mL，

任選地，所述TPO的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選20ng/mL，

任選地，所述SCF的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選25ng/mL，

任選地，所述Flt-3L的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選50ng/mL，

任選地，所述CAPE的濃度為0.1μg/mL-10μg/mL，優(yōu)選1μg/mL。

4.一種用于體外培養(yǎng)造血干/祖細胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有CAPE，

任選地，進一步包含IL-3、IL-6、TPO、SCF和Flt-3L，

任選地，所述CAPE、IL-3、IL-6、TPO、SCF和Flt-3L分別設(shè)置在不同的容器中，

任選地，進一步包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為無血清Stemspan培養(yǎng)基或StemlineII培養(yǎng)基，

任選地，所述CAPE、IL-3、IL-6、TPO、SCF和Flt-3L的至少之一溶解于所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，

任選地，所述IL-3的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選10ng/mL，

任選地，所述IL-6的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選20ng/mL，

任選地，所述TPO的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選20ng/mL，

任選地，所述SCF的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選25ng/mL，

任選地，所述Flt-3L的濃度為10-100ng/mL，優(yōu)選50ng/mL，

任選地，所述CAPE的濃度為0.1μg/mL-10μg/mL，優(yōu)選1μg/mL。

5.一種用于體外培養(yǎng)造血干/祖細胞的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求2或3所述的細胞培養(yǎng)基。

6.權(quán)利要求2或3所述的細胞培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)造血干/祖細胞中的用途。

7.權(quán)利要求4或5所述的試劑盒在體外培養(yǎng)造血干/祖細胞中的用途。

8.一種體外培養(yǎng)造血干/祖細胞的方法，其特征在于，包括：

利用權(quán)利要求2或3所述的細胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞，所述CD34陽性細胞是從人臍血單個核細胞中分選獲得的，

任選地，所述人臍血單個核細胞是通過密度梯度離心的方法分離獲得的，

任選地，通過磁珠分選系統(tǒng)，利用CD34抗體從所述人臍血單個核細胞中分選獲得CD34陽性細胞，

任選地，

按照1×10⁶個/孔的接種密度，于5%CO₂飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱中將所述人臍血單個核細胞進行所述培養(yǎng)；

按照2×10⁵個/孔的接種密度，于5%CO₂飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱中將所述CD34陽性細胞進行所述培養(yǎng)。

9.一種造血干/祖細胞或其衍生物，其特征在于，是通過權(quán)利要求8所述的體外培養(yǎng)造血干/祖細胞的方法獲得的。

10.一種體外培養(yǎng)造血干/祖細胞的系統(tǒng)，其特征在于，包括：

分離裝置，所述分離裝置用于從人臍血中分離人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞；以及

培養(yǎng)裝置，所述培養(yǎng)裝置與所述分離裝置相連，并且設(shè)置有權(quán)利要求2或3所述的細胞培養(yǎng)基，用于對所述人臍血單個核細胞或CD34陽性細胞進行培養(yǎng)，

任選地，所述分離裝置中進一步包括分選組件，所述分選組件設(shè)置于所述分離裝置上，適于利用CD34抗體從所分離的人臍血單個核細胞中進一步分選CD34陽性細胞，

任選地，所述分選組件適于利用小鼠抗人CD34抗體-微磁珠從所分離的人臍血單個核細胞中進一步分選CD34陽性細胞，

任選地，所述分選組件為miniMACS分離系統(tǒng)。