[發明專利]火木層孔菌中1,2-苯二酚在抗禽流感H5N1病毒上的應用

有效

• 申請號: 201310404207.0
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103816138A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 趙晨;宋愛榮;孔超;孫效樂;秦丹
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A61K31/05
• 分類號: A61K31/05;A61P31/16;C07C39/08;C07C37/82;A01G1/04
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1.1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用。

2.如權利要求1所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于苯二酚是從火木層孔菌中提取的，提取步驟順序如下：

(1)?制備火木層孔菌粗提物；

(2)?將步驟（1）所得的乙醇沉淀物與正相硅膠混勻攪拌，干燥后進行硅膠正相柱層析，使用洗脫劑洗脫2-5次，得到洗脫液；

(3)?將步驟（2）中的最后一次洗脫液蒸干，等體積硅膠拌樣，進行正相硅膠層析，使用洗脫劑洗脫；

(4)?收集步驟（3）中的洗脫液，減壓濃縮，使用氯仿：甲醇=1:1溶解，進行甲醇凝膠柱層析，使用洗脫劑洗脫，使用TLC檢測收集的洗脫液，適當合并洗脫液，減壓干燥；

(5)?用步驟（4）中得到的產物再次進行正相硅膠層析，使用洗脫劑洗脫；

(6)?收集步驟（5）中得到的洗脫液，使用TLC檢測各洗脫液，適度合并洗脫液，減壓干燥，即為1,2-苯二酚。

3.如權利要求2所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于所述火木層孔菌粗提物，由下述方法制得：

(1)將火木層孔菌菌種以常規方法接種到裝有液體培養基的三角燒瓶內，以20～35℃溫度，搖瓶轉速為80～280r/min，pH?3～8條件下，震動培養7～15天；培養中當pH值降到2.5～4時，將搖瓶中的種子接種到50L發酵罐的培養液中，以溫度20～35℃，發酵罐壓力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH?3～8，通氣量0.5～1.1vvm，攪拌速度100～280轉/分的條件，培養7～15天，即可得到火木層孔菌菌絲體發酵全液；

(2)取步驟(1)中所得火木層孔菌菌絲體發酵全液，將其以常規方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/2～1/5；

(3)用體積百分比為60～95%的乙醇對上述步驟(2)濃縮后的發酵液進行提取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的2～8倍，能夠使提取液中乙醇濃度達到60～90%；

(4)對步驟(3)所得提取液在50～70℃條件下，加熱1～2小時；以常規方法進行分離，并通過二級過濾除去雜質，分離獲得乙醇提取液；將上述乙醇提取液以常規方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5～1/10；

(5)將將步驟(4)所得的濃縮液以低溫冷凍干燥的方法進行干燥，得火木層孔菌粗提物。

4.如權利要求3所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于所述液體培養基配方以克/100毫升計是：

玉米淀粉????1-5%?????????????葡萄糖??????1-5%

蛋白胨?????0.1-0.5%??????????酵母膏?????0.1-0.5%

硫酸鎂?????0.1-0.5%??????????磷酸二氫鉀?0.01-0.05%。

5.如權利要求3所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于火木層孔菌粗提物制備步驟（3）的乙醇為濃度65%-95%食用乙醇，所用體積為3-6倍體積。

6.如權利要求2所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于，步驟(2)中所述的拌樣硅膠為100-200目正相硅膠，層析硅膠為正相200-300目，洗脫劑為氯仿或甲醇。

7.如權利要求2所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于，步驟(3)中所述的硅膠用量為等體積，洗脫劑為石油醚：丙酮=20:1-35:1。

8.如權利要求2所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于，步驟(4)中所述的凝膠為Sephadex?LH-20，洗脫劑為氯仿：甲醇=1:1。

9.如權利要求2所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于，步驟(5)所述的層析硅膠為200-300目，洗脫劑為氯仿：甲醇=200:1-50:1。

10.如權利要求2所述的1,2-苯二酚在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征在于，步驟(6)所述的檢測要點是出現斑點，展開劑為石油醚：丙酮=20：1-35:1。