[發明專利]一種抗禽流感病毒的樟芝發酵全液乙醇提取物的制備方法

在審

• 申請號: 201310403703.4
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103860605A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 宋愛榮;趙晨;孔超;秦丹;梁大勇
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A61K36/07
• 分類號: A61K36/07;A61P31/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種抗禽流感病毒的樟芝發酵全液乙醇提取物的制備方法，尤其涉及樟芝（Antrodia?camphorata）Ac001，已于2005?年9月21日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，?保藏編號為CGMCC?No.1460，保藏地址為北京市海淀區中關村北一條13號，中國科學院微生物研究所。?

背景技術

關于抗禽流感病毒的樟芝發酵全液乙醇提取物的制備方法，經檢索到的相關專利有：中國專利申請號為99112556.8?灰樹花發酵液多糖提取方法，?02136517.2?灰樹花發酵工藝及其多糖肽的生產方法，89105471?一種云芝糖肽（PSP）的生產方法，92109345?香菇多糖及香菇菌多糖提取工藝，96109095中國靈芝保健飲料，92111030靈芝營養保健液及其制法，93103116靈芝口服液等專利，這些專利內容大多以提取多糖為主要目的，其中灰樹花、云芝和靈芝三種制備的活性物質提取物具有抗腫瘤、抗高血壓、降低血糖、抗肥胖、抗肝炎等藥效，但對于抗病毒作用鮮有報道，而對于抗禽流感病毒的報道更是沒有檢索到。?

發明內容

本發明要解決的問題是，針對上述抗禽流感病毒的樟芝全液發酵乙醇提取物的制備方法以及其制備的乙醇提取物的藥理作用所存在的不足，提供一種抗禽流感病毒的樟芝發酵全液乙醇提取物的制備方法。利用本發明的方法提取的樟芝發酵全液乙醇提取物對禽流感病毒具有抑制作用，并且對正常細胞具有保護作用，且該方法具有工藝簡便、成本低、具有抗禽流感的特點。?

本發明的抗禽流感病毒的樟芝發酵全液乙醇提取物的制備方法，?包括三種制備形式：其一為直接從樟芝菌發酵全液包括菌絲體與澄清液中用乙醇分離出活性物質；其二為先將樟芝菌發酵全液分離成菌絲體與澄清液，再從所得菌絲體中用乙醇分離出活性物質；其三為先將樟芝菌發酵全液分離成菌絲體與澄清液，再從所得澄清液中用乙醇分離出活性物質。由以下步驟組成：?

所述的抗禽流感病毒的樟芝菌發酵全液乙醇提取物的制備方法，其特征是，所述樟芝菌發酵全液乙醇提取物由下述方法制得：

?加熱濃縮：取經液體發酵的樟芝菌發酵全液或澄清液放于容器內，在溫度50～70℃，壓力0.2～0.6Kg/cm2，真空度為0.02～0.06Mpa的條件下進行減壓濃縮，使減壓濃縮后的發酵全液或澄清液是原體積的1/4～1/2。

?乙醇提取：經濃縮后的樟芝菌發酵全液或澄清液的溫度降到30℃一下，往容器中加入80%-95%的乙醇，使濃縮后的樟芝菌發酵全液或澄清液的醇溶液的醇度達到60～70%左右，然后繼續加熱，溫度控制在30～70℃，加熱時間是30～240分鐘。?

?過濾：之后冷卻、以180～200目的篩網過濾樟芝菌發酵全液或澄清液，收集濾液，濾渣以其4～8倍體積的80%-95%乙醇稀釋，重復上述操作1～2遍，離心收集濾液；?

減壓濃縮：過濾后棄去濾渣，合并收集的濾液，在溫度50～70℃，壓力0.2～0.6Kg/cm²，真空度為0.02～0.06Mpa的條件下進行減壓濃縮，回收乙醇，使濾液濃縮至原有體積的1/5～1/10；

收集物干燥：?將上述濃縮后的濾液，在50～60℃溫度條件下干燥120～480小時，揮發多余的乙醇；?

(7)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，置35℃條件下進行粉碎，經200目篩網過篩后，即為樟芝菌抗禽流感病毒活性的乙醇提取物。

其中，步驟所述的樟芝菌發酵全液是指樟芝（Antrodia?camphorata）發酵液與菌絲體的集合體。步驟所述的樟芝澄清液是指樟芝（Antrodia?camphorata）發酵后澄清液?

所述樟芝菌通過以下步驟進行發酵：

（1）液體種子培養：采用500毫升三角瓶，每瓶裝200毫升液體培養基，將10%的樟芝菌種以常規方法接種到裝有液體培養基的三角燒瓶內，調節pH為3-8，培養溫度為20-35℃，搖瓶轉速為80-280r/min，培養7-15天，即可得到樟芝液體種子；