[發明專利]一種抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法

有效

• 申請號: 201310403702.X
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103819569A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 宋愛榮;趙晨;孔超;田雪梅;梁大勇
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P31/16
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法，尤其涉及樟芝（Antrodia?camphorata）Ac001，已于2005?年9月21日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，?保藏編號為CGMCC?No.1460，保藏地址為北京市海淀區中關村北一條13號，中國科學院微生物研究所。?

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背景技術

關于抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法，經檢索到的相關專利有：中國專利申請號為99112556.8?灰樹花發酵液多糖提取方法，?02136517.2?灰樹花發酵工藝及其多糖肽的生產方法，89105471?一種云芝糖肽（PSP）的生產方法，92109345?香菇多糖及香菇菌多糖提取工藝，96109095中國靈芝保健飲料，92111030靈芝營養保健液及其制法，93103116靈芝口服液等專利，這些專利內容大多以提取多糖為主要目的，其中灰樹花、云芝和靈芝三種制備的活性物質提取物具有抗腫瘤、抗高血壓、降低血糖、抗肥胖、抗肝炎等藥效，但對于抗病毒作用鮮有報道，而對于抗禽流感病毒的報道更是沒有檢索到。?

發明內容

本發明要解決的問題是，針對上述抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法以及其制備的發酵提取物的藥理作用所存在的不足，提供一種抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法。利用本發明的方法提取的樟芝發酵菌絲體粗多糖對禽流感病毒具有明顯的抑制作用，并且對正常細胞具有保護作用，且該方法具有工藝簡便、成本低、藥效好的特點。?

本發明的抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法，包括兩種制備形式：其一為直接從樟芝發酵全液中菌絲體分離出活性物質；其二為從樟芝固體發酵培養菌絲體中分離出活性物質。由以下步驟組成：?

所述的抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法，其特征是，所述樟芝發酵菌絲體粗多糖由下述方法制得：

(1)加熱提取：取經液體發酵或固體發酵的樟芝菌絲體放于容器內，加入10-20倍的蒸餾水或純凈水，調整其pH值為8～12，置60～120℃下加熱100～240分鐘，趁熱過濾，濾渣再加入10倍的蒸餾水，重復上述步驟再次加熱提取，然后過濾，將兩次濾液合并；

(2)減壓濃縮：合并收集的濾液，在溫度50～70℃，壓力0.2～0.6Kg/cm²，真空度為0.02～0.06Mpa的條件下進行減壓濃縮，使濾液濃縮至原有體積的1/10～1/20；

(3)除色素：取濃縮后的提取液，用氨水調pH至6.0～8.0，于30～45℃下攪拌，按每10ml滴加1ml～2ml?10?%～30%的H₂O₂，進行脫色10～24h，得到淡黃色液體，?

(4)除小分子化合物：然后利用透析袋，截留分子量3000～5000以上，4℃～10℃條件下透析24h～48h，去除多余的H2O2、小分子化合物。

(5)除脂肪：取上述提取液，裝入索氏提取器,石油醚加熱回流提取2～6h,待冷卻后，棄去石油醚層，回收余下的提取液。?

(6)醇析：在回收的提取液中，加入量為其體積4～8倍的乙醇溶液并不斷攪拌，攪拌速度為30～60r/min，10～20分鐘后，靜置24～48小時進行醇析；?

(7)離心分離：醇析后棄上清液，沉淀物移入離心管中，以轉速為3000～5000r/min離心20～30min，離心后棄去上清液，收集離心沉淀物；

(8)收集物干燥：將上述收集的離心沉淀物，在50～70℃溫度條件下干燥36～48小時；?

(9)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，進行粉碎，經200目篩網過篩后即為樟芝菌絲體粗多糖。

其中，所述的樟芝發酵全液是指樟芝（Antrodia?camphorata）發酵液與菌絲體的集合體。?

步驟?所述的樟芝菌絲體是指樟芝（Antrodia?camphorata）菌株液體發酵和固體發酵所得的菌絲體?

所述樟芝通過以下步驟進行發酵：

（一）液體發酵

（1）液體種子培養：采用500毫升三角瓶，每瓶裝200毫升液體培養基，將10%的樟芝菌種以常規方法接種到裝有液體培養基的三角燒瓶內，調節pH為3-8，培養溫度為20-35℃，搖瓶轉速為80-280r/min，培養7-15天，即可得到樟芝液體種子；