[發明專利]一種抗禽流感病毒的樟芝發酵菌絲體粗多糖的制備方法

有效

• 申請號: 201310403702.X
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103819569A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 宋愛榮;趙晨;孔超;田雪梅;梁大勇
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P31/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗禽流感病毒的樟芝菌絲體粗多糖的制備方法，其特征是，所述樟芝菌絲體粗多糖由下述方法制得：

(1)加熱提取：取經液體發酵或固體發酵的樟芝菌絲體放于容器內，加入10-20倍的蒸餾水或純凈水，調整其pH值為8～12，置60～120℃下加熱100～240分鐘，趁熱過濾，濾渣再加入10倍的蒸餾水，重復上述步驟再次加熱提取，然后過濾，將兩次濾液合并；

(2)減壓濃縮：取合并的濾液，在溫度50～70℃，壓力0.2～0.6Kg/cm²，真空度為0.02～0.06Mpa的條件下進行減壓濃縮，使濾液濃縮至原有體積的1/10～1/20；

(3)除色素：取濃縮后的提取液，用氨水調pH至6.0～8.0，于30～45℃下攪拌，按每10ml滴加1ml～2ml?10?%～30%的H₂O₂，進行脫色10～24h，得到淡黃色液體，?

(4)除小分子化合物：然后利用透析袋，截留分子量3000～5000以上，4℃～10℃條件下透析24h～48h，去除多余的H₂O₂、小分子化合物；

(5)除脂肪：取上述提取液，裝入索氏提取器,石油醚加熱回流提取2～6h,待冷卻后，棄去石油醚層，回收余下的提取液；

(6)醇析：在回收的提取液中，加入量為其體積4～8倍的醇溶液并不斷攪拌，攪拌速度為30～60r/min，10～20分鐘后，靜置24～48小時進行醇析；

(7)離心分離：醇析后棄上清液，沉淀物移入離心管中，以轉速為3000～5000r/min離心20～30min，離心后棄去上清液，收集離心沉淀物；

(8)收集物干燥：將上述收集的離心沉淀物，在50～70℃溫度條件下干燥36～48小時；?

(9)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，進行粉碎，經200目篩網過篩后即為樟芝菌絲體粗多糖；

步驟?所述的樟芝菌絲體是指樟芝（Antrodia?camphorata）菌株液體發酵和固體發酵所得的菌絲體。

2.如權利要求1所述的抗禽流感病毒的樟芝菌絲體粗多糖的制備方法，其特征在于所述樟芝液體發酵或固體發酵經分離獲得樟芝發酵菌絲體。

3.如權利要求1或2所述的抗禽流感病毒的樟芝菌絲體粗多糖的制備方法，其特征在于，所述樟芝液體發酵通過以下步驟進行：

（1）液體種子培養：采用500毫升三角瓶，每瓶裝200毫升液體培養基，將10%的樟芝菌種以常規方法接種到裝有液體培養基的三角燒瓶內，調節pH為3-8，培養溫度為20-35℃，搖瓶轉速為80-280r/min，培養7-15天，即可得到樟芝液體種子；

（2）發酵罐發酵：先將發酵罐中的培養基進行滅菌，滅菌壓力為0.1～0.2公斤/平方厘米，滅菌時間為1-2小時；當樟芝液體種子pH值降至2.5-4時，將搖瓶中的樟芝種子接種到50L發酵罐的培養液中，調整pH為5-8，培養溫度25-35℃，通氣量0.5-1.1vvm，攪拌轉速100-250r/min，培養7-30天，即可獲得樟芝發酵全液，經過濾得到菌絲體。

4.如權利要求3所述的抗禽流感病毒的樟芝菌絲體粗多糖的制備方法，其特征在于，所述液體種子培養基或發酵培養基配方以克/100毫升計是：

地瓜淀粉?????1～3%?????????????????葡萄糖??????????1～5%

蛋白胨???????0.2～0.6%?????????????酵母膏????????0.2～0.5%

硫酸鎂???????0.1～0.3%?????????????磷酸二氫鉀???0.05～0.1%。

5.如權利要求1或2所述的抗禽流感病毒的樟芝菌絲體粗多糖的制備方法，其特征在于，所述樟芝固體發酵通過以下步驟進行：

將樟芝液體菌種接種至事先制備的固體培養基的菌包中，其含水量約為65%，?15×30?cm菌袋，每袋重150?g～1050?g，pH自然，培養溫度25℃～27℃、空氣相對濕度50%～70%、黑暗培養100?d?～160?d，待菌包表面全部呈桔紅色后，開包取出菌絲體，粉碎后進行提取；

所述固體培養基配方以百分含量計是：

玉米芯40%，?????樟木屑40%，???????麩皮15%，

乳糖3%，????????磷酸二氫鉀1%，????硫酸鎂1%。