[發(fā)明專利]從莫勒菌中提取5α,8α-環(huán)二氧-24(R)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310402936.2
• 申請(qǐng)日: 2013-09-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103468778A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱君志;郭慶豐;張以盼;曹麗萍;何肖云;孟麗雪;董冬;凃潔;李小霞;姚靈丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P33/20
• 分類號(hào): C12P33/20;C07J71/00;A61P35/00;A61P33/06;C12R1/645
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及從莫勒菌中提取一種甾體化合物5α,?8α-環(huán)二氧-24(R)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法。

背景技術(shù)

蟲(chóng)生真菌生態(tài)學(xué)上被認(rèn)為是一種寄生在昆蟲(chóng)體內(nèi)或者外殼表面，并最終能夠引起宿主昆蟲(chóng)死亡的一種真菌，這種真菌是產(chǎn)生天然活性化合物的重要資源，莫勒菌(Moelleriella)是蟲(chóng)生真菌的重要成員，隸屬于糞殼菌綱，肉座菌目，麥角菌科。隨著研究的深入，近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)莫勒菌的代謝產(chǎn)物具有抗菌、抗腫瘤和抗瘧原蟲(chóng)等生物活性，這預(yù)示該菌在生物農(nóng)藥或醫(yī)藥上存在很大應(yīng)用價(jià)值。

??5α,8?α-?環(huán)二氧-24(R?)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇,有一定的細(xì)胞毒活性和抗瘧原蟲(chóng)活性，是一種麥角固醇的衍生物，而麥角固醇是麥角固醇是一種重要的醫(yī)藥化學(xué)原料，所以該化合物含有很重要的潛在的醫(yī)學(xué)價(jià)值，有待進(jìn)一步活性研究。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供從莫勒菌中提取一種甾體化合物5α,8?α-?環(huán)二氧-24(R?)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：?

一種從莫勒菌中提取甾體化合物5α,?8α-?環(huán)二氧-24(R?)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

1）將莫勒菌活化后，取菌塊接種PDB培養(yǎng)基中，在120?r/min、26℃條件下連續(xù)培養(yǎng)7天，按10％接種量再次轉(zhuǎn)接到PDB培養(yǎng)基中，繼續(xù)在120?r/min、26℃條件下連續(xù)培養(yǎng)31天得發(fā)酵物；?

2）發(fā)酵物經(jīng)抽濾得到菌絲體，菌絲體在35℃下恒溫干燥后，用甲醇浸提后旋蒸濃縮至干，用水溶解后用乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液濃縮得浸膏；

3）將浸膏上200~300目硅膠柱，進(jìn)行粗分；分別以石油醚：二氯甲烷=(3:1,?2:1,?1:1)減壓硅膠柱洗脫。

4）將3）中得到的石油醚：二氯甲烷1:1洗脫成分,經(jīng)減壓濃縮后上200~300目硅膠柱，以石油醚：乙酸乙酯體積比=5:1等度洗脫，經(jīng)TLC分析，收集相同Rf值相同的洗脫液，旋蒸濃縮。

所述步驟1）中接種菌塊的大小為0.5×0.5cm，接種量為5塊。

所述步驟2）中浸提要用1-3倍體積甲醇浸提48小時(shí)，每8小時(shí)超聲20分鐘。

所述步驟2）中具體操作為：發(fā)酵物經(jīng)抽濾得到菌絲體，菌絲體在35℃下恒溫干燥后，用甲醇浸提后旋蒸濃縮至干，用200mL水溶解后與乙酸乙酯按體積比1：1.5混合，倒入分液漏斗中，搖瓶萃取菌液3~5次，每次5～10min。

所述步驟4）中石油醚：乙酸乙酯體積比=5:1等度洗脫，收集TLC分析中以石油醚：丙酮=3：1為展開(kāi)劑時(shí)R_f值為0.2-0.3的組分。

本發(fā)明的技術(shù)效果：

本發(fā)明以繁殖快、周期短的真菌為材料，成本低，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，無(wú)需昂貴的儀器，通過(guò)多次進(jìn)行硅膠柱層析，制得了一種甾體化合物5α,8?α-?環(huán)二氧-24(R)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇。

附圖說(shuō)明

圖1?單體化合物TLC（石油醚：丙酮=3:1）

圖2?化合物的的¹H?NMR譜

圖3?化合物的¹³C?NMR譜

圖4化合物的¹³C?NMR譜(下)和DEPT?135譜(上)

圖5化合物的COSY譜

圖6化合物的HSQC譜

圖7化合物的HMBC譜

圖8化合物的NOSEY譜

圖9化合物的EI-MS譜

圖10化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

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具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：甾體化合物5α,8?α-?環(huán)二氧-24(R?)-甲甾-6,22-二烯-3β-醇的制備