[發明專利]一種煙草疫霉菌分子檢測引物及其檢測方法

無效

• 申請號: 201310402932.4
• 申請日: 2013-09-07
• 公開（公告）號: CN103555823A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 李本金;陳慶河;翁啟勇;何美玲;謝世勇;謝廷鑫
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種煙草疫霉菌分子檢測引物，其特征在于引物序列為：

上游引物YhF:?5'-?GACATGATATCAACTGTTCTGCAG?-3'，

下游引物YhR:?5'-?CCTTGGATCTTCTCTCGATAAG?-3'；

對煙草疫霉菌特異性擴增出342?bp的產物。

2.一種利用權利要求1引物的煙草疫霉菌檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）從被煙草疫霉菌感染的植物組織中提取DNA；

（2）以步驟（1）提取的DNA為模板，利用YhF/YhR這一對引物進行PCR擴增；?

（3）取適量步驟（2）的PCR擴增產物用瓊脂糖電泳分離，經溴化乙錠染色后于紫外燈下觀察，根據擴增產物的大小判定結果，如果能特異性地擴增出342?bp的產物，即可判斷所述的植物組織中存在煙草疫霉菌。

3.根據權利要求2所述的煙草疫霉菌檢測方法，其特征在于：所述的步驟（2）PCR擴增的條件為：PCR反應體系25?μl，包括2.5?μL?10×PCR?buffer，2.0?mmol/L?MgC1₂，0.2?mmol/L?dNTP，1.0?U?Taq?DNA聚合酶，引物YhF/YhR各0.4?μmol/L，25?ng?DNA模板，不足部分用無菌超純水補足；擴增程序為95?℃預變性5?min，94?℃變性30?s，66℃退火?45?s，72?℃延伸30?s，共35個循環，最后72?℃延伸10?min。