[發明專利]濕法球磨聯合酶法提取菜籽多肽的方法

無效

• 申請號: 201310401899.3
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103436581A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 莊義慶;吳琴燕;楊敬輝
• 申請（專利權）人: 江蘇丘陵地區鎮江農業科學研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

技術領域

本發明屬于食品加工技術領域，涉及濕法球磨聯合酶法提取菜籽多肽的方法。

背景技術

油菜是重要的油料作物之一，我國油菜產量居世界第一位。一般情況下，油菜籽經加工可得約3506菜籽油和65%左右菜籽粕。菜籽粕中富含粗蛋白質，粗脂肪，卵磷脂，多種維生素，氨基酸等，其蛋白質中可消化蛋白質含量可達27.8%。此外，菜籽粕中還含有較高膽堿，生物素，葉酸，煙酸及硫氨素，核黃素等B族維生素和?Ca，P，Fe，Se，Cu，Zn，Mn等多種微量元素。菜籽粕的粗蛋白質含量一般在35%—45%，為優質的全價植物蛋白，對其進行開發利用具有重要的經濟意義與社會意義。但是，目前我國對菜籽粕的利用相當有限，僅用作肥料或按少量比例添加到反芻動物和淡水魚類的養殖飼料中，這造成了一定的資源浪費。

近年來，越來越多的研究表明肽比蛋白質具有更優秀的性質?，F代生物代謝研究發現：由多個氨基酸結合而成的低聚肽比游離氨基酸更容易被消化吸收，其中尤以二肽，三肽吸收為最快最好。相比于原料蛋白及相同組成的氨基酸，酶解產物多肽能表現出良好的持水力，凝膠性，表面活性等物理功能特性及抗氧化，降血脂，調節免疫力等多種生理功能，而這些是原料蛋白質和組成游離氨基酸所不具備的。因此，將菜籽粕用來加工高附加值產品，具有顯著的社會意義和經濟意義。

蛋白質的水解方法一般包括酸堿降解法和酶解法。酸堿法水解動物蛋白是利用蛋白質在不同PH下溶解度不同，先在極端條件下使絕大部分蛋白質溶解，去掉不溶解物，再調PH至蛋白質的等電點沉淀回收?；瘜W降解法以其操作簡單，成本低，蛋白質收率高等特點成為早期蛋白質水解的主要手段，但化學法水解蛋白質存在許多缺陷，如：（1）環境污染大；（2）水解產物成分復雜，鹽分過高，使用范圍受到很大限制，不適合應用于食品，保健品，化妝品等原料；（3）酸堿法難以控制反應進程，不能實現目標產物的定位水解。綜合考慮，近幾年已經很少采用化學法水解蛋白質，取而代之的是酶法水解蛋白質。

蛋白酶能在溫和的條件下水解食物類蛋白，不會造成大的環境污染，實現定位水解，易于實現水解進程的控制，從而使肽類的應用性和功能性變廣，滿足市場的需求。但是酶解蛋白質并不是一個簡單的工藝過程，它涉及到很多步驟。第一步就是篩選合適的酶，因為酶不僅影響反應的速率，產物的得率，而且直接影響到產品的風味，理化特性和生理活性；第二步菜籽中蛋白的溶出，菜籽中結構是復雜的結晶結構，蛋白不易溶出，無法與酶結合水解。目前酶解過程中，主要是直接將菜籽餅粉碎水解，此過程菜籽蛋白大部分不溶于水，酶解效率低。

發明內容

本發明的目的是提供一種條件溫和，無污染，效率高，菜籽多肽制備方法，從而進一步實現提高菜籽的附加值。

為了實現上述目的，本發明提出如下技術方案：

濕法球磨聯合酶法提取菜籽多肽的方法，包括以下步驟：?

（1）濕法微粉碎：取脫脂脫殼干燥菜籽粕，粉碎過40目篩后，以脫脂脫殼干燥菜籽粕的重量計，加入物料重量5倍的水，加入纖維素酶5-10u/g，采用球磨機在轉速為250-400rpm條件下對黑豆豆粕粉進行濕法粉碎1-3h得到超細粉體懸濁液。

（2）?酶水解：于超細粉體懸濁液中補充水量至干物濃度為50-100g/l，調整pH至7.0，以脫脂脫殼干燥菜籽粕的重量計，加入蛋白酶40u/g，維持溫度55℃、pH7.0、水解1-2h；所述干物指脫脂脫殼干燥菜籽粕的重量。

（3）酶解液在10000rpm條件下離心15min，取下層殘渣，繼續加入殘渣重量5-10倍的水，以脫脂脫殼干燥菜籽粕重量計，加入20u/g的蛋白酶，在溫度55℃、pH7.0、水解1-2h，離心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液。

優選的，所述步驟（1）中球磨機為行星式球磨機。

優選的，所述步驟（2）中利用質量分數為2%的氫氧化鈉和質量分數為1%的鹽酸調整pH。

優選的，所述步驟（2）或（3）中所述蛋白酶為Flavourzyme蛋白酶。

本發明將濕法球磨微粉碎對菜籽餅進行預處理，至中位徑可至5um左右；結合蛋白酶進行水解，發現預處理多肽得率大幅度提高。通過大量試驗研究，最終獲得了最佳步驟。

材料：脫脂脫殼干燥菜籽粕、堿性蛋白酶。

本發明的技術方案，將球磨超微粉碎、水、纖維素酶三者聯合，對脫脂菜籽粕進行超微粉碎，顆粒細化，纖維素溶解使得蛋白質等大分子物質更加容易水解，還可提高蛋白質的水解速率，另外，使多肽轉化率大幅度提高。采用雙縮脲法檢測溶液中多肽的含量，計算脫脂菜籽粕多肽的轉化率最高可達75%。