[發(fā)明專利]火木層孔菌中環(huán)二肽C8在抗禽流感H5N1病毒上的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310401670.X
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103800333A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙晨;宋愛榮;孔超;黃芳;秦丹
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A61K31/4985
• 分類號: A61K31/4985;A61P31/16;C07D487/04;A01G1/04
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1.環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于所述環(huán)二肽C8為（（8aS）?-六氫吡咯并[1,2-a〕吡嗪-1,4?-?二酮。

2.如權(quán)利要求1所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于環(huán)二肽C8是從火木層孔菌中提取的，提取步驟順序如下：

(1)制備火木層孔菌粗提物；

(2)將上述步驟（1）所得的粗提物與正相硅膠混勻攪拌，并干燥，進(jìn)行硅膠正相柱層析，用洗脫劑洗脫2-5次；

(3)收集上述步驟（2）得到的最后一次洗脫液，減壓濃縮，使用甲醇溶解，甲醇凝膠柱層析，用洗脫劑洗脫；

(4)將步驟（3）得到的產(chǎn)物進(jìn)行正相硅膠層析，用洗脫劑洗脫；

(5)收集洗脫液，適當(dāng)合并，減壓蒸干，進(jìn)行甲醇凝膠層析；

(6)將步驟（5）得到的產(chǎn)物進(jìn)行常壓反相層析，洗脫劑為甲醇與水；

(7)HPLC檢測，減壓干燥，即為環(huán)二肽C8。

3.如權(quán)利要求2所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于所述火木層孔菌粗提物，由下述方法制得：

(1)將火木層孔菌菌種以常規(guī)方法接種到裝有液體培養(yǎng)基的三角燒瓶內(nèi)，以20～35℃溫度，搖瓶轉(zhuǎn)速為80～280r/min，pH?3～8條件下，震動培養(yǎng)7～15天；培養(yǎng)中當(dāng)pH值降到2.5～4時(shí)，將搖瓶中的種子接種到50L發(fā)酵罐的培養(yǎng)液中，以溫度20～35℃，發(fā)酵罐壓力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH?3～8，通氣量0.5～1.1vvm，攪拌速度100～280轉(zhuǎn)/分的條件，培養(yǎng)7～15天，即可得到火木層孔菌菌絲體發(fā)酵全液；

(2)取步驟(1)中所得火木層孔菌菌絲體發(fā)酵全液，將其以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/2～1/5；

(3)用體積百分比為60～95%的乙醇對上述步驟(2)濃縮后的發(fā)酵液進(jìn)行提取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的2～8倍，能夠使提取液中乙醇濃度達(dá)到60～90%；

(4)對步驟(3)所得提取液在50～70℃條件下，加熱1～2小時(shí)；以常規(guī)方法進(jìn)行分離，并通過二級過濾除去雜質(zhì)，分離獲得乙醇提取液；將上述乙醇提取液以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5～1/10；

(5)將將步驟(4)所得的濃縮液以低溫冷凍干燥的方法進(jìn)行干燥，得火木層孔菌粗提物。

4.如權(quán)利要求3所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于所述液體培養(yǎng)基配方以克/100毫升計(jì)是：

玉米淀粉????1-5%?????????????葡萄糖??????1-5%

蛋白胨?????0.1-0.5%??????????酵母膏?????0.1-0.5%

硫酸鎂?????0.1-0.5%??????????磷酸二氫鉀?0.01-0.05%。

5.如權(quán)利要求3所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于火木層孔菌粗提物制備步驟（3）的乙醇為濃度65%-95%食用乙醇，所用體積為3-6倍體積。

6.如權(quán)利要求2所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于，步驟(2)中所述的拌樣硅膠為100-200目正相硅膠，洗脫劑為氯仿和/或甲醇；步驟(3)中所述的洗脫劑為甲醇。

7.如權(quán)利要求2所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于，步驟(4)中所述的正相硅膠為200-300目，洗脫劑為氯仿與甲醇。

8.如權(quán)利要求2所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于，步驟(5)中所述的凝膠類型為LH-20。

9.如權(quán)利要求2所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于，步驟(6)所述的反相材料為C-18或者C-8使用常壓反相制備；洗脫劑為甲醇：水=40%-85%；反相層析次數(shù)為1-3次。

10.如權(quán)利要求2所述的環(huán)二肽C8在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應(yīng)用，其特征在于，步驟(7)所述的HPLC條件為0min：95%水，10min：100%甲醇，出鋒時(shí)間為5.85-6.54min。