[發(fā)明專利]基于代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量判別的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310401539.3
• 申請日: 2013-09-05
• 公開（公告）號: CN104422742A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙春霞;沈丹紅;路鑫;常玉瑋;張俊杰;趙燕妮;許國旺
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 劉陽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析化學領(lǐng)域，是一種基于新鮮煙葉中的酚類物質(zhì)含量對代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量進行判別的方法。

背景技術(shù)

植物代謝組學是通過考察植物受刺激或擾動后其代謝產(chǎn)物的變化或其隨時間的變化，來研究植物體系的一種技術(shù)。代謝物是基因調(diào)控的最終產(chǎn)物，是聯(lián)系基因型和生物表型的紐帶，通過小分子代謝物的定性和定量分析可直接反映植物體當前的生理狀態(tài)。在植物代謝組學研究中，要想得到真實客觀的定性定量分析數(shù)據(jù)，其樣品質(zhì)量極為重要，這與樣品保存條件密切相關(guān)。對于不能在取樣后立刻提取代謝產(chǎn)物的植物樣品，通常建議超低溫保存。超低溫保存是指在-80℃以下的極低溫度環(huán)境下保存生物樣品，此法可大大減慢甚至終止植物樣品的代謝和衰老過程，保持植物材料的穩(wěn)定性。

作為最早開展植物次生代謝研究的模式植物之一，煙草的分子代謝特征及重要代謝物的變化規(guī)律研究正逐漸受到關(guān)注。各種煙草靶向代謝組學及非靶向代謝組學研究技術(shù)也正被逐漸開發(fā)及應(yīng)用。但由于煙草樣品保存不當而導致的質(zhì)量發(fā)生變化、代謝物水平不能反映煙草樣品真實狀態(tài)的情況時有發(fā)生。急需一種簡單、快速的分析方法對植物代謝組學研究中的煙草樣品質(zhì)量進行判別。

酚類化合物是植物中分布最廣泛的次生代謝產(chǎn)物之一，主要由單寧類、黃酮類、香豆素類物質(zhì)組成。酚類化合物具有調(diào)節(jié)自身生長、抗病毒、抗逆等生理功能，煙草中的酚類化合物在煙草的生長、煙草病毒的防治、煙葉的調(diào)制、分級及卷煙香氣等方面都起著重要作用。近年來有關(guān)煙草中酚類化合物的提取、檢測等方法的報道也是層出不窮，但未曾有人提出將新鮮煙葉中的酚類物質(zhì)含量或含量比值用于代謝組學新鮮煙葉樣品質(zhì)量的判別。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種對代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量進行判別的方法。利用新鮮煙葉中蕓香苷與山奈酚-3-O-蕓香糖苷（簡稱山奈酚苷）含量的比值對代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量進行判別，該法操作簡單快速、結(jié)果準確可靠。

為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明技術(shù)方案為：

基于代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量判別的方法：通過檢測新鮮煙葉中蕓香苷與山奈酚-3-O-蕓香糖苷（簡稱山奈酚苷）含量，計算其比值，對代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量進行判別。

其具體方法為：1）稱取一定量的新鮮煙葉樣本，加入含內(nèi)標的提取溶劑，超聲10-20分鐘后離心，將上清液移至進樣瓶中用于HPLC分析。

2）HPLC分析方法的具體參數(shù)：色譜柱Symmetry?C18（5μm4.6mm×250mm）；柱溫30℃；檢測波長340nm；進樣量5μL；柱流量1.0mL/min；流動相A為含體積濃度10%甲醇的水溶液（含體積濃度2%乙酸），流動相B為含體積濃度10%水的甲醇溶液（含體積濃度2%乙酸）；洗脫梯度：0min時90/10（A/B，V/V），15min時70/30(A/B，V/V)，26min時10/90(A/B，V/V)并保持2min，28.1min時90/10（A/B，V/V），隨后保持起始梯度90/10（A/B，V/V）至35min；其中0-15min為第一段線性梯度洗脫、15-26min為第二段線性梯度洗脫。

所述內(nèi)標為牡荊黃素，其含量為0.012g/L，所述提取溶劑為含甲醇60-90%的水溶液，所述煙草鮮葉與含內(nèi)標的提取溶劑按質(zhì)量（mg）/體積（mL）比加入量為=25:1-3。

采用高效液相色譜法（HPLC）對新鮮煙葉樣品中的蕓香苷及山奈酚苷進行絕對定量分析，分析步驟如下：

HPLC分析數(shù)據(jù)可定性新鮮煙葉中的蕓香苷及山奈酚苷，通過繪制標準曲線可對所測定的蕓香苷、山奈酚苷進行絕對定量；將蕓香苷與山奈酚苷含量的比值作為區(qū)分代謝組學合格樣品、變質(zhì)的不合格樣品及部分變質(zhì)的不合格樣品的標準，即待測品種中蕓香苷與山奈酚苷含量的比值在6.4及以上的為合格樣品，可用于代謝組學分析，蕓香苷與山奈酚苷含量的比值在2.0以下的為變質(zhì)的不合格樣品，蕓香苷與山奈酚苷含量的比值在2.0-6.4之間的為部分變質(zhì)的不合格樣品。

本發(fā)明研究人員經(jīng)過大量新鮮煙葉樣品的分析研究，發(fā)現(xiàn)新鮮煙葉如果保存不當，其酚類物質(zhì)的含量會發(fā)生較大變化，蕓香苷與山奈酚-3-O-蕓香糖苷（簡稱山奈酚苷）含量的比值也會明顯降低，此類樣品將不能用于代謝組學分析。因此可以以蕓香苷與山奈酚苷含量的比值作為一個標準對代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量進行判別。本發(fā)明的優(yōu)點