[發明專利]一株能生物合成1,2?二氫睪內酯(testololactone)的簡單青霉及合成方法

有效

• 申請號: 201310400600.2
• 申請日: 2013-09-04
• 公開（公告）號: CN104419646B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 吳洽慶;王玉;楊貝貝;陳曦;朱敦明;馬延和
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P33/20;C12R1/80
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.簡單青霉(Penicillium simplicissimum)WY134-2，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號：CGMCC No.8017。

2.權利要求1所述簡單青霉WY134-2的發酵培養方法，其包括以下步驟：

1)種子培養

將簡單青霉(Penicillium simplicissimum)WY134-2接入滅菌后的種子液體培養基中，于30℃，200～300r/min培養16h～20h，得到種子液，

液體培養基的配制如下：葡萄糖30g/L，玉米漿干粉10g/L，NaNO₃2g/L，KCl0.5g/L，K₂HPO₄·3H₂O2g/L，KH₂PO₄1g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，FeSO₄·7H₂O0.02g/L，pH6.2；

2)發酵培養

將步驟(1)得到的種子液體按接種量3～5％接種到發酵培養基中進行發酵培養，培養條件：30℃，搖床轉速200～250r/min，發酵時間16～20h，即得到菌體的發酵液，

所述發酵培養基的成分為：葡萄糖30g/L，玉米漿干粉10g/L，NaNO₃2g/L，KCl0.5g/L，K₂HPO₄·3H₂O2g/L，KH₂PO₄1g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，FeSO₄·7H₂O0.02g/L，pH8.0。

3.一種制備1，2-二氫睪內酯(testololactone)的生物合成方法，其特征是，以孕甾-4-烯-3，20-二酮或17β-羥基-雄甾-4-烯-3-酮或3β-羥基-5-雄烯-17-酮或17α-羥基孕甾-4-烯-3，20-二酮為底物，利用權利要求1所述簡單青霉菌株通過如下步驟實現1，2-二氫睪內酯的制備：將1～3g/L上述底物加入到簡單青霉菌發酵液中，于28～31℃，250r/min條件下，轉化24～48h終止反應，加入濃鹽酸調節pH至1.0～2.0，40℃，振蕩24h，用乙酸乙酯萃取發酵液數次，合并萃取液，干燥，減壓濃縮，濃縮后采用硅膠色譜柱分離得到1，2-二氫睪內酯。