[發明專利]一種重樓藥材多指標快速檢測方法

有效

• 申請號: 201310399571.2
• 申請日: 2013-09-05
• 公開（公告）號: CN103487395A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 吳永江;劉博文;金葉;陳勇;劉雪松
• 申請（專利權）人: 浙江大學;云南白藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N21/3563
• 分類號: G01N21/3563;G01N21/359
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬于近紅外檢測領域，具體涉及一種重樓藥材多指標快速檢測方法。

背景技術

????中藥重樓為百合科植物云南重樓Paris?polyphylla?Smith?Var.yunnanensis?(Franch.)?Hand.-Mazz.或七葉一枝花Prais?polyphylla?Smith?Var.chinensis?(Franch.)Hara的干燥根莖，其主要化學成分為甾體皂苷，并含有β-蛻皮激素、多糖、黃酮苷及氨基酸，具有較強的生理和藥理活性，包括抗腫瘤、止血止痛、抑菌消炎、免疫調節等作用，廣泛應用于臨床。

原藥材檢查是過程質量分析和控制的源頭。由于地理位置、氣候條件、生長環境等因素差異，不同產地的同一類藥材在活性成分的含量和種類上往往差異較大，因此對原藥材進行質量評價十分必要。重樓藥材中含有重樓皂苷-I、重樓皂苷-II、重樓皂苷-VII等多種化合物，化學成分復雜，而且水分的存在可能影響這些有效成分的藥效，影響藥材的穩定性，影響生產成本等。目前，對原藥材的質量控制主要依靠傳統質量分析方法，耗時費力，故研究開發一種重樓藥材多指標快速檢測方法，具有現場藥材篩選和質量全面評價的應用前景。

近紅外光譜（NIR）技術是一種間接分析技術，是通過定標模型的建立來實現對未知樣本的定性或定量分析，具有快速、無損、原位與無污染等特點。近年來，近紅外分析技術作為一種間接分析技術，已應用于中藥質量控制及生產應用領域中，包括藥材、復方中藥和中藥各種劑型的定性定量，以及利用光纖探頭技術實現對中藥生產工藝的在線連續監控等。

《川滇地區重樓商品藥材質量評價》（尹鴻翔等，《中藥材》，2007年7月第30卷第7期，p771-774），雖公開了高效液相色譜法的條件，但其參數與本專利中參數差異較大。此外，將近紅外分析技術用于重樓藥材中關鍵質控指標的含量測定國內外均無此方面的應用報道，因此研究一種方法來快速檢測重樓藥材中各關鍵質控指標是非常有必要的，有助于提高中藥產品的穩定性、安全性和有效性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種重樓藥材多指標快速檢測方法。采用近紅外分析技術能夠快速測定重樓藥材中重樓皂苷-I、重樓皂苷-II、重樓皂苷-VII、總皂苷和水分的含量，實現原藥材質量的快速評價。

本發明的目的是通過以下技術方案實現：?

（1）重樓藥材樣品的收集；

收集不同批次且具有代表性的重樓藥材不少于80批，隨機選擇其中19~30個的樣品作為驗證集，其余樣品作為校正集進行定量校正模型的建立。

（2）用傳統方法測定各關鍵質控指標：

重樓藥材中各關鍵質控指標包括：重樓皂苷-I、重樓皂苷-II、重樓皂苷-VII、總皂苷和水分；

將樣品經預處理后采用液相色譜法測定重樓皂苷-I、重樓皂苷-II、重樓皂苷-VII的含量，總皂苷含量為以上三種皂苷的總和；使用烘干稱重法測定水分含量。

樣品預處理方法：將重樓藥材打粉，過80目篩，取細粉約0.5?g，精密稱定，置平底燒瓶中，精確加入甲醇10?mL，稱定質量，超聲波提取45?min，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，離心10?min（轉速為13000?rp·min^-1），取上清液用于高效液相色譜分析。

高效液相色譜法條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫0~25?min：25~95%A，25~30?min：95%A；檢測波長203?nm；流速：1.0?mL·min^-1；柱溫：30℃；進樣量：10?μL；理論板數按重樓皂苷-I峰計算應不低于4000。

烘干稱重法為：將重樓藥材打粉，過80目篩，精密稱取重樓粉末2?mg于干燥恒重的扁形瓶中，置烘箱內100-105℃干燥5?h，移至干燥器中冷卻30?min，精密稱定，再在上述溫度下干燥1?h，冷卻，稱重，至連續兩次差不超過5?mg，計算水分含量。

（3）采集樣品的近紅外光譜圖：

分別使用漫反射采樣器件采集步驟（1）所述的校正集和驗證集樣品的近紅外光譜，采樣次數為32次，分辨率為8?cm^-1，以儀器內置背景為參比，掃描光譜范圍為4000~10000?cm^-1，每個樣品掃描重復3次，取平均光譜作為樣品光譜；

（4）定量模型的建立：