[發(fā)明專利]一種斑馬魚體內(nèi)ROS檢測(cè)模型的建立方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310398791.3
• 申請(qǐng)日: 2013-09-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103430890B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 勞喬聰;李春?jiǎn)?/a>;朱鳳;俞航萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京新環(huán)檢測(cè)科技有限公司
• 主分類號(hào): A01K61/00
• 分類號(hào): A01K61/00;A61K49/00;G01N21/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種斑馬魚體內(nèi)ROS檢測(cè)模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）斑馬魚的發(fā)育階段的確定，選擇受精后3天的斑馬魚作為最佳發(fā)育階段；

（2）檢測(cè)用斑馬魚數(shù)量的確定，選擇1尾作為最佳的斑馬魚數(shù)量；

（3）陽(yáng)性對(duì)照化合物谷胱甘肽的濃度確定，選擇100μM作為陽(yáng)性對(duì)照化合物谷胱甘肽的最佳濃度；

所述的步驟（1）~（3）中，用ROS熒光檢測(cè)試劑carboxy-H₂DCFDA處理斑馬魚。

2.如權(quán)利要求1所述的斑馬魚體內(nèi)ROS檢測(cè)模型的構(gòu)建方法，其特征在于，還包括以下步驟：

（4）微孔板分析，將斑馬魚放入96孔板，然后將微孔板置于多功能微孔板分析儀下檢測(cè)熒光值。

3.如權(quán)利要求1或2所述的斑馬魚體內(nèi)ROS檢測(cè)模型在篩選抗氧化藥物中的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的斑馬魚體內(nèi)ROS檢測(cè)模型在篩選抗氧化藥物中的應(yīng)用，其特征在于：還包括以下步驟：

設(shè)置多個(gè)實(shí)驗(yàn)組：8個(gè)化合物處理組，1個(gè)對(duì)照組，1個(gè)模型組，1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組；化合物以溶解的方式給藥；所有的實(shí)驗(yàn)組含有相同的反應(yīng)液，反應(yīng)液為5μg/ml的carboxy-H₂DCFDA；于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時(shí)；使用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組的熒光值；統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以±SE表示，多組間比較采用單因子方差分析，兩組間比較采用Dunnett’s T-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，p<0.05為差異性顯著。