[發明專利]一種化學發光測定三聚氰胺的方法

有效

• 申請號: 201310398470.3
• 申請日: 2013-09-04
• 公開（公告）號: CN103439320A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 混旭
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種化學發光測定三聚氰胺的方法，其特征是包括以下步驟：

FMB1的制備：將磁性金納米粒子用磷酸緩沖液洗滌后，加入200?μl?1.0×10^-5?M的DNA1和1.0×10^-5?M的DNA2混合物，在37°C下反應12小時；將所得的功能化磁性金納米粒子（FMB1）用磷酸鹽緩沖液洗滌，然后分散在磷酸鹽緩沖液中，保存在4°C下備用；

FMB2的制備：將磁性金納米粒子用磷酸緩沖液洗滌后，100?μl?1.0×10^-5?M的H1，在37°C下反應12小時；將所得的功能化磁性金納米粒子（FMB2）用磷酸鹽緩沖液洗滌，然后分散在磷酸鹽緩沖液中，保存在4°C下備用；

制備HRP（辣根過氧化物酶）修飾的H1：在100?μl?1.0×10^-5?M的H1加入10?mg?NHS（N-羥基琥珀酰亞胺），?20?mg?EDC（1-（3-二甲氨基醛）-3-乙基二亞胺鹽酸鹽），在37?°C下攪拌1小時，然后加入100?μl?HRP，在37?°C下攪拌過夜，即得；

制備HRP修飾的H2：在100?μl?1.0×10^-5?M的H2加入10?mg?NHS，?20?mg?EDC，在37?°C下攪拌1小時，然后加入100?μl?HRP，在37?°C下攪拌過夜，即得；

1.5?Me（三聚氰胺）的檢測：取含Me的標準溶液50?μL加入到200?μL的FMB1溶液，37°C反應40分鐘，然后混合物在磁力架上分離，將上清液轉移到FMB2溶液中；然后加入含有?5.0×10^-7?M?HRP-H1和?5.0×10^-7?M?HRP-H2溶液200?μL，在?37?℃反應?1?h后進行磁分離，除去上清液，將磁珠用?100?μL磷酸緩沖溶液清洗兩遍后，分散于1.0?ml磷酸緩沖溶液中，然后進行化學發光檢測。

2.權利要求1所述的DNA序列為：

2.1?DNA1的部分序列為：5′-TTT?TTT?TTT?TTT?CCA?AAA?GGG-(CH₂)₆-SH-3；

2.2?DNA2的部分序列為：5′-TGG?AAA?AAA?AAA?AAA-3′；

2.3?H1的部分序列為：5′-NH₂-(CH₂)-GCG?AGG?TTT?TTT?TTT?TTT?CCA?GCG?CCG?CAC?AGA????TGG?AAA?AAA??AAA?AAA-3′；

2.4?H2的部分序列為:?5′-TGG?AAA?AAA?AAA?AAA?AGG?GTA?GCG?CCG?TTT?TTT?TTT?TTT?CCA?ATT?AGA-(CH₂)₆-NH₂-3′。

3.根據權利要求1所述的化學發光測定三聚氰胺的應用。