[發明專利]一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201310396462.5
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN103698284A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 王金鳳;蔣欣
• 申請（專利權）人: 柏榮診斷產品（上海）有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法。

背景技術

免疫球蛋白（Ig）輕鏈分為κ（kappa）和λ（lambda）2個型別，每個Ig分子上只有一個型別的輕鏈，人類κ（kappa）和λ（lambda）的比例為6：4。輕鏈為能自由通過腎小球基底膜的小分子蛋白質，在腎小管被重吸收回到血液循環中，所以正常人尿中只有少量輕鏈存在。當人體發生代謝失調和多發性骨髓瘤時，血液中出現大量游離輕鏈，并由尿中排出，即為Bence-Jones蛋白（本周蛋白）。在正常人體內，血清κ型游離輕鏈為3～19mg/L，λ型游離輕鏈為6～26mg/L，κ/λ比值為0.26～1.65。異常情況的κ型游離輕鏈以及和κ/λ比值、或異常λ型游離輕鏈和κ/λ比值、或同時三者均異常等情況，對單克隆性γ球蛋白增多癥（monoclonal?gammopathies,MGP）的敏感性為88%～98%；對非分泌性骨髓瘤（nonsecretory?myeloma,NSM）的敏感性為65%～70%，有助于單克隆輕鏈病、AL-淀粉樣變的早期診斷，也可用于化療或自身外周血干細胞移植后是否復發的監測，如果化療或移植效果好，則病患血清κ型游離輕鏈、λ型游離輕鏈以及κ/λ比值均在正常水平或相比治療前有明顯改善。

膠乳增強比濁方法可在全自動生化儀上測定λ型游離輕鏈，速度快、通量高。對于游離輕鏈的測定，國內目前主要使用英國Binding?site公司的Freelite系列測定試劑，可以通過膠乳增強比濁方法測定Lambda游離輕鏈；但在臨床應用中，Freelite系列的Lambda游離輕鏈測定試劑存在大量的非特異反應，造成很多結果與病人實際情況不符合，不僅不能給醫生診斷帶來參考，還容易誤導醫生判斷，目前在國內醫院推廣應用很有限。

同時，發明人使用按照常規方式制備的Lambda游離輕鏈試劑，在未使用該特殊發明方法時也出現與Freelite試劑類似的非特異反應情況；由于不論是Freelite系列Lambda游離輕鏈測定試劑還是發明人自行制備的Lambda游離輕鏈試劑，均存在臨床測定非特異反應嚴重的問題，因此，可以認為非特異反應嚴重是Lambda游離輕鏈比濁測定試劑盒制備中一大共同難點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于為了克服現有的Lambda游離輕鏈測定非特異反應的缺陷，提供了一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法。本發明的測定方法可以得到可靠的Lambda游離輕鏈測定結果。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：

本發明提供了一種采用膠乳增強比濁方法測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒，其包括反應緩沖液（R1試劑）和Lambda游離輕鏈抗體溶液（R2試劑），其特征在于，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中吐溫-20的濃度為11～16ml/L。

其中，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中的Lambda游離輕鏈抗體較佳地為兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體，更佳地為Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體（即Dako公司的Polyclonal?Rabbit?Anti-Human?Lambda?Free?Light?Chains，貨號為A0101）。

其中，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液的組成較佳地為Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體（貨號為A0101）0.5mg/ml、膠乳微球3mg/ml、吐溫-2011～16ml/L和防腐劑Proclin-3000.3ml/L。上述組成中，膠乳微球可購于國際知名膠乳供應商，如Bangslab公司或JSR公司。

其中，所述的反應緩沖液可為本領域Lambda游離輕鏈濃度測定方法中膠乳增強比濁方法常規使用的反應緩沖液，優選反應緩沖液的組成為4-羥乙基哌嗪乙磺酸（Hepes）100mmol/L、氯化鈉150mmol/L、吐溫-201ml/L和防腐劑Proclin-300?0.3ml/L。

本發明還提供了一種測定Lambda游離輕鏈濃度的方法，其包括下述步驟：采用膠乳增強比濁方法，將待測樣品與上述反應緩沖液和Lambda游離輕鏈抗體溶液混合后，計算吸光度變化ΔA，與標準品的工作曲線比較即可得到待測樣品的Lambda游離輕鏈濃度，其特征在于，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中吐溫-20的濃度為11～16ml/L。