[發明專利]一種測定Kappa游離輕鏈濃度的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201310396461.0
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN103728455A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 王金鳳;蔣欣
• 申請（專利權）人: 柏榮診斷產品（上海）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種測定Kappa游離輕鏈濃度的試劑盒及方法。

背景技術

免疫球蛋白（Ig）輕鏈分為κ（kappa）和λ（lambda）2個型別，每個Ig分子上只有一個型別的輕鏈，人類κ（kappa）和λ（lambda）的比例為6：4。輕鏈為能自由通過腎小球基底膜的小分子蛋白質，在腎小管被重吸收回到血液循環中，所以正常人尿中只有少量輕鏈存在。當人體發生代謝失調和多發性骨髓瘤時，血液中出現大量游離輕鏈，并由尿中排出，即為Bence-Jones蛋白（本周蛋白）。在正常人體內，血清κ型游離輕鏈為3～19mg/L，λ型游離輕鏈為6～26mg/L，κ/λ比值為0.26～1.65。異常情況的κ型游離輕鏈以及和κ/λ比值、或異常λ型游離輕鏈和κ/λ比值、或同時三者均異常等情況，對單克隆性γ球蛋白增多癥（monoclonal?gammopathies,MGP）的敏感性為88%～98%；對非分泌性骨髓瘤（nonsecretory?myeloma,NSM）的敏感性為65%～70%，有助于單克隆輕鏈病、AL-淀粉樣變的早期診斷，也可用于化療或自身外周血干細胞移植后是否復發的監測，如果化療或移植效果好，則病患血清κ型游離輕鏈、λ型游離輕鏈以及κ/λ比值均在正常水平或相比治療前有明顯改善。

膠乳增強比濁方法可在全自動生化儀上測定κ型游離輕鏈，速度快、通量高。對于游離輕鏈的測定，國內目前主要使用英國Binding?site公司的Freelite系列測定試劑，可以通過膠乳增強比濁方法測定Kappa游離輕鏈；但在臨床應用中，Freelite系列試劑存在大量的臨床標本稀釋不成線性問題，這些標本測定結果明顯不符合臨床癥狀，目前在國內醫院推廣應用很有限。（注：稀釋成線性是指按照一定比例手工使用生理鹽水稀釋臨床標本，測定稀釋后標本的結果應該與按照原始濃度和稀釋比例計算的理論結果偏差在正負20%以內。線性也為體外診斷試劑的注冊基本要求之一，通常稀釋不成線性的標本結果是不可靠的。造成線性問題的主要原因有試劑配方抗血液成分干擾問題、抗體特異性問題等等。）

同時，發明人使用按照常規方式制備的Kappa游離輕鏈試劑，在未使用該特殊發明方法時也出現與Freelite試劑類似的臨床標本稀釋不成線性問題情況；由于不論是Freelite系列Kappa游離輕鏈測定試劑還是發明人自行制備的Kappa游離輕鏈試劑，均存在臨床標本稀釋不成線性問題，因此，可以認為臨床標本稀釋是否成線性是Kappa游離輕鏈比濁測定試劑盒制備中一大共同難點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于為了克服現有的Kappa游離輕鏈測定不成線性的缺陷，提供了一種測定Kappa游離輕鏈濃度的試劑盒及方法。本發明的測定方法可以得到可靠的Kappa游離輕鏈測定結果。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：

本發明提供了一種采用膠乳增強比濁方法測定Kappa游離輕鏈濃度的試劑盒，其包括反應緩沖液（R1試劑）和Kappa游離輕鏈抗體溶液（R2試劑），其特征在于，所述的反應緩沖液中氯化鈉的濃度為1250～2400mmol/L。

其中，所述的Kappa游離輕鏈抗體溶液中的Kappa游離輕鏈抗體較佳地為兔抗人多克隆Kappa游離輕鏈抗體，更佳地為Dako公司的兔抗人多克隆Kappa游離輕鏈抗體（即Dako公司的Polyclonal?Rabbit?Anti-Human?Kappa?Free?Light?Chains，貨號為A0100）。

較佳地，當反應緩沖液的組成為4-羥乙基哌嗪乙磺酸（Hepes）100mmol/L、氯化鈉1250～2400mmol/L、吐溫-201ml/L和防腐劑Proclin-3000.3ml/L時，Kappa游離輕鏈抗體溶液的組成為Dako公司的兔抗人多克隆Kappa游離輕鏈抗體（貨號為A0100）0.5mg/ml、膠乳微球3mg/ml、吐溫-201ml/L和防腐劑Proclin-3000.3ml/L。上述組成中，膠乳微球可購于國際知名膠乳供應商，如Bangslab公司或JSR公司。