[發明專利]高乳化性CNPPs-大豆多肽組裝蛋白的制備方法

有效

• 申請號: 201310394997.9
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN103483455A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 張娜;郭慶啟;朱秀清;石彥國;馬永強;侯俊才
• 申請（專利權）人: 哈爾濱商業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種CNPPs-大豆多肽組裝蛋白的制備方法。

背景技術

我國大豆蛋白種類較為單一，有兩方面不足是其發展的瓶頸：一是從營養學角度看，大豆蛋白的氨基酸組成中含硫氨基酸(主要是蛋氨酸，Met)含量極低(僅為1.0～1.4g／100g)；二是從應用性來看，大豆蛋白的分散性、溶解性、乳化性、乳化穩定性等功能性質欠佳。CNPPs(酪蛋白非磷酸肽)是利用酪蛋白工業化生產酪蛋白磷酸肽(casein?phosphopeptides，CPPs)的副產物，以疏水性氨基酸為主，我國目前有近80％的CNPPs未被合理利用，作為飼料或廢物棄去。

針對大豆蛋白種類較為單一，且乳化性和乳化穩定性欠佳的問題，同時將CNPPs這種廢棄物進行充分回收利用，本發明以乳源酪蛋白酶解形成酪蛋白磷酸肽過程中副產物——酪蛋白非磷酸肽作為原料之一，通過胰凝乳酶及其它調控手段經plastein反應將酪蛋白非磷酸肽導入大豆多肽中，形成CNPPs-大豆多肽組裝蛋白。

發明內容

本發明是將CNPPs這種廢棄物進行充分回收利用，要解決現有大豆蛋白種類較為單一，且乳化性和乳化穩定性欠佳的問題，提供一種高乳化性CNPPs-大豆多肽組裝蛋白的制備方法。

本發明高乳化性CNPPs-大豆多肽組裝蛋白的制備方法，按以下步驟進行：

一、將3g酪蛋白粉術置于100mL蒸餾水中，攪拌均勻，制備酪蛋白懸濁液，按照酶底比為1∶25向酪蛋白懸濁液中加入Alcalase堿性蛋白酶，調整懸濁液pH值為8.0，酶解3h，然后對酶解后的溶液調整pH值至4.6，并于4000r／min下離心10min，取上清液，向上清液中加入12g／mL的CaCl₂溶液和體積濃度為50％的乙醇溶液，上清液與CaCl₂溶液的體積比為4∶1，上清液與乙醇溶液的體積比為5∶1，反應10min后于4000r／min下離心10min，然后取上清液采用旋轉蒸發的方式進行濃縮，得到質量濃度為80％的CNPPs溶液；

二、將3g脫脂豆粕置于100mL蒸餾水中，攪拌均勻，制備脫脂豆粕懸濁液，向脫脂豆粕懸濁液中加入Alcalase堿性蛋白酶，調整懸濁液pH值為8.0，于55℃下酶解6h，得蛋白水解液，對蛋白水解液進行透析和超濾處理后，去除分子量小于1000Da的部分，取分子量大于1000Da的部分進行旋轉蒸發，得到質量濃度為80％的大豆多肽溶液；

三、將步驟一和步驟二制備的溶液與胰凝乳酶混合，然后共同置于42℃水浴條件下，攪拌2min，調整反應體系的pH值至4.8，反應3h，將反應后的產物過濾，干燥后制得CNPPs-大豆多肽組裝蛋白粉。

步驟二中加入的Alcalase堿性蛋白酶的體積為脫脂豆粕懸濁液體積的5％。

步驟三中胰凝乳酶的質量為步驟一和步驟二制備的溶液總體積的5％。

步驟一所述酶底比是指Alcalase堿性蛋白酶與酪蛋白懸濁液的體積比。

步驟一和步驟二中的Alcalase堿性蛋白酶購買自sigma公司。

步驟三中的胰凝乳酶購買自荷蘭代夫特DSM公司。

本發明的有益效果：

本發明在大豆蛋白和酪蛋白這兩種天然生物大分子基礎上，采用胰凝乳酶催化聯合自組裝技術經plastein反應向大豆蛋白肽中導入CNPPs，借助材料科學和聚合物科學中的自組裝理論可控性設計CNPPs同大豆蛋白肽的重組體，不僅對于提升大豆蛋白和乳蛋白制品的加工技術水平進而拓寬其應用范疇具有重要的理論及實踐價值，而且對研發新型蛋白基生物材料具有重要的科學意義，填補我國植物蛋白同動物蛋白重組體的應用基礎性研究領域的空白。

通過對本發明方法制備得到的組裝蛋白功能性評價發現，CNPPs-大豆多肽組裝蛋白產物乳化性為0.28±0.02，乳化穩定性為13.44±0.47min，比大豆多肽的乳化性提高了1.9倍，比大豆多肽的乳化穩定性提高了1.37倍(P＜0.0001)。CNPPs-大豆多肽組裝蛋白的產率高達45.26±0.62％。

附圖說明

圖1為大豆多肽以及CNPPs-大豆多肽組裝蛋白的乳化性和乳化穩定性評價結果。

具體實施方式

具體實施方式一：本實施方式高乳化性CNPPs-大豆多肽組裝蛋白的制備方法，按以下步驟進行：