[發(fā)明專利]25羥-維生素D3定量免疫層析檢測試劑卡及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310394860.3
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN103439519A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葉濤
• 申請（專利權(quán)）人: 天津朗賽生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/82
• 分類號: G01N33/82;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

1.一種25-羥基維生素D3定量免疫層析檢測試劑卡，包括依次形成有稀釋液孔（1）、加樣孔（2）和觀察窗（3）的盒蓋（4），盒體（5）內(nèi)底部形成的檢測試紙條架（6）一端形成有端護欄（7），另一端形成有側(cè)護欄（8），盒蓋（4）底面形成的插突起（9）與盒體（5）的插孔柱（10）插接結(jié)合；以及沿檢測試紙條架（6）長度方向平鋪的檢測試紙條（11），檢測試紙條（11）的塑料基板（12）兩端分別設(shè)置的樣品墊（13）和吸樣墊（14），其特征在于：樣品墊（13）和吸樣墊（14）之間依次設(shè)置有：含有膠體金標(biāo)記的25-羥基維生素D3抗體的膠體金墊（15），分別包被有25-羥基維生素D3偶聯(lián)蛋白的T線（16）和抗鼠IgG的C線（17）的NC膜（18）。

2.權(quán)利要求1所述25-羥基維生素D3定量免疫層析檢測試劑卡的制備方法，包括依次形成有稀釋液孔（1）、加樣孔（2）和觀察窗（3）的盒蓋（4），盒體（5）內(nèi)底部形成的檢測試紙條架（6）一端形成有端護欄（7），另一端形成有側(cè)護欄（8），盒蓋（4）底面形成的插突起（9）與盒體（5）的插孔柱（10）插接結(jié)合；以及沿檢測試紙條架（6）長度方向平鋪的檢測試紙條（11），檢測試紙條（11）的塑料基板（12）兩端分別設(shè)置有樣品墊（13）和吸樣墊（14），其特征在于：樣品墊（13）和吸樣墊（14）之間依次設(shè)置有：含有膠體金標(biāo)記的25-羥基維生素D3抗體的膠體金墊（15），分別包被有25-羥基維生素D3偶聯(lián)蛋白的T線（16）和抗鼠IgG的C線（17）的NC膜（18）；

所述樣品墊（13）和吸樣墊（14）之間依次設(shè)置有含有膠體金標(biāo)記25-羥基維生素D3抗體的膠體金墊（15），分別包被有25-羥基維生素D3偶聯(lián)蛋白的T線（16）和抗鼠IgG的C線（17）的NC膜（18），其中：

a.含有膠體金標(biāo)記的25-羥基維生素D3抗體的膠體金墊（15）的制備過程為：金顆粒直徑為30～50nm的膠體金溶液10ml，于燒杯內(nèi)用0.2M?K₂CO₃調(diào)至pH7.5～8.5，加入25～75μg?25-羥基維生素D3抗體，室溫攪拌30min，加入終濃度為0.5%牛血清白蛋白，5%?PEG?20000?封閉20min，12000g離心20分鐘，棄上清，用膠體金溶液復(fù)溶至80ml，按1ml溶液鋪20cm²的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜或無紡布上，置干燥間干燥3～5小時，制成膠體金墊（15）；

b.所述NC膜（18）抗體的包被過程為：以0.01M?pH?7.4?磷酸鹽緩沖液將25-羥基維生素D3-偶聯(lián)蛋白配制成0.8～1.6mg/ml的溶液，在NC膜（18）上用噴膜儀以1～1.5μl/cm的量包被T線（16）；另將抗鼠IgG配制成1～3mg/ml的溶液，用噴膜儀以上述相同參數(shù)包被C線（17），劃線后將NC膜（18）干燥3～5小時，制成包被25-羥基維生素D3-偶聯(lián)蛋白的T線（16）和包被抗鼠IgG的C線（17）的NC膜（18）；

c.在相對濕度小于30%的條件下，取塑料基板12，將已包被的NC膜（18）粘貼在塑料基板（12）的中部，在NC膜（18）的T線（16）一側(cè)粘貼膠體金墊（15），在膠體金墊（15）另一側(cè)粘貼樣品墊（13）；在NC膜（18）的C線（17）一側(cè)粘貼吸樣墊（14）；鄰接接口相互疊壓1～2mm，粘貼好的大板切成3～5mm寬的檢測試紙條（11）備用。