[發(fā)明專利]一種全細胞轉化高效生產α-苯丙酮酸的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310392427.6
• 申請日: 2013-09-02
• 公開（公告）號: CN103642743A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設計）人: 陳堅;劉龍;堵國成;李江華;侯穎
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P7/40;C12R1/19
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種用于生產α-苯丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，是重組表達了脫氨酶基因的大腸桿菌。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述脫氨酶基因來源于奇異變形桿菌(Proteus?mirabilis)。

3.一種構建權利要求2所述基因工程菌的方法，其特征在于，具體步驟為以P.mirabilis?KCTC2566的基因組DNA為模板，PCR擴增核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的脫氨酶基因后連接到載體pET-20b(+)，將所得重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)。

4.權利要求1所述基因工程菌在生產α-苯丙酮酸中的應用。

5.一種應用權利要求2所述基因工程菌全細胞轉化高效生產α-苯丙酮酸的方法，其特征在于，將種子培養(yǎng)液按1%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至OD為1.0，添加終濃度0.4mM的IPTG，30℃誘導5h，收集細胞，將1.4-25.2g/L細胞、4-24g/L底物L-苯丙氨酸，pH5-9，25-45℃條件下，轉化6-36h，將轉化體系進行離心，上清含α-苯丙酮酸。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述底物L-苯丙氨酸濃度為14.0g/L，細胞濃度為8.4g/L，35℃，轉化16h。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，種子培養(yǎng)基組成為：蛋白胨1g，酵母粉0.5g，NaCl1g，自來水定容至100mL。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：蛋白胨12g，酵母提取物24g，甘油4mL；各組分溶解后高壓滅菌，冷卻到60℃，再加100mL滅菌的含17mmol/LKH₂PO₄和72mmol/L?K₂HPO₄的溶液。