[發明專利]攜帶miR-199*的脂肪間充質干細胞在肝癌細胞治療中的應用及其構建方法

無效

• 申請號: 201310390748.2
• 申請日: 2013-08-30
• 公開（公告）號: CN103451155A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 樓國華;劉艷寧;陳智
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0775;C12N15/63;A61K35/12;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

1.攜帶miR-199*的脂肪來源的間充質干細胞的構建方法，其特征在于：包括如下步驟：

1）脂肪來源的間充質干細胞的制備：脂肪組織經DPBS清洗后，用Ⅰ型膠原酶37℃消化1小時，然后室溫離心后棄去上層油脂和液體，細胞沉淀以DPBS重懸洗滌2遍后離心收集細胞，接種在含5%胎牛血清的低糖DMEM培養基的培養瓶內，細胞貼壁增殖接近80%融合時，進行消化、傳代，依此法傳代2-4次，達到純化和擴增間充質干細胞的目的，收集細胞凍存、復蘇備用；

2）攜帶miR-199*的脂肪來源的間充質干細胞的制備：miR-199*表達質粒通過電轉法導入AMSC，以EGFP指示轉染效率，以轉染無關miRNA的表達質粒作為對照，以表達質粒所帶的Blasticidine抗性基因進行篩選，篩選4-6周后可獲得穩定表達miR-199*的攜帶miR-199*的脂肪來源的間充質干細胞。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：所述脂肪組織為成人脂肪組織，所述miR-199*為has-miR-199*。

3.攜帶miR-199*的脂肪來源的間充質干細胞，其特征在于：具有間充質干細胞的基本特性。

4.攜帶miR-199*的脂肪來源的間充質干細胞，其特征在于：可提高肝癌細胞對化療藥物的敏感性。

5.攜帶miR-199*的脂肪來源的間充質干細胞在制備肝癌細胞治療制劑中的應用。

6.攜帶miR-199*的脂肪來源的間充質干細胞在制備肝癌細胞化療增敏制劑中的應用。

7.根據權利要求3-6任一所述的應用，其特征在于：所述的肝癌細胞為HepG2,Huh7和Hep3B。

8.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于：所述制劑可控制肝癌細胞增殖或轉移。

9.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于：所述制劑可提高肝癌對化療藥物的敏感性。

10.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于：所屬制劑的劑型為注射劑。