[發明專利]一種依替巴肽的液相合成方法

有效

• 申請號: 201310390106.2
• 申請日: 2013-08-30
• 公開（公告）號: CN103450346A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 高秀偉;高秀巖;任孝敏;王樸
• 申請（專利權）人: 煙臺海安多肽藥物研發技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/02
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 楊立

技術領域

本發明涉及一種依替巴肽的液相合成方法，屬于生物化學領域。

背景技術

依替巴肽由美國COR?Therapeutic公司研發，1998年在美國上市，用于急性冠脈綜合癥的治療。通過抑制凝血因子Ⅰ，與血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受體結合，從而抑制血小板聚集。在臨床應用中，對不穩定型心絞痛、急性心肌梗死、冠狀動脈介入等心血管疾病的治療均顯示了良好療效。目前，心血管疾病逐年增加已成為現代社會對人類健康威脅嚴重的常見病之一，依替巴肽做為多肽類心血管系統藥物，具有藥效高、毒副作用低等優點，得到臨床的廣泛應用，且需求量逐年增加。

當前依替巴肽的合成方法主要以固相合成法為主，專利CN200,910,104,99公開了一種依替巴肽的固相合成方法，該合成方法以Sieber樹脂為固相合成樹脂，采用Fmoc/tBu逐一偶聯合成側鏈全保護線性肽，在進行多肽偶聯，將依替巴肽粗品從固相樹脂上切除，再分離純化得到依替巴肽純品。雖然此法可以有效合成依替巴肽，但原料昂貴，且線性肽合成副產物多，原料利用率較低。

現有的液相合成法也有報道，專利CN200,910,101,674公開了一種新的依替巴肽的全液相合成方法，專利CN200,910,156,804提供了一種依替巴肽的合成液相制備工藝，但是這些液相合成方法中依替巴肽的收率較低，不適合工業化生產。

在目前已知的合成方法中，依替巴肽固相合成做為實驗室研究是一種理想的方法，此法高效、迅速，但固相合成法原料利用率低，使用的試劑及溶劑昂貴且不易處理，常用的乙二硫醇、DMF等溶劑毒性大不適合產業化生產。此外該法采用價格昂貴的高精氨酸為起始原料，其在有機溶劑中溶解性差，導致副產物增加，降低了合成效率。此外，在現有的液相合成法中，因收率低只能小規模生產，僅局限在1L左右的反應釜內進行。這些都導致因依替巴肽售價高而增加患者的負擔，因此，目前亟需一種新的可以規模化生產的合成方法來降低依替巴肽的成本，降低依替巴肽的售價，減輕患者的經濟負擔。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種能大規模制備依替巴肽的液相合成方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：一種依替巴肽的液相合成方法，包括以下六個階段（1）合成肽段Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH₂；（2）合成肽段H-Asp(R₃)-Trp-Pro-Cys(R₄)-NH₂；（3）將肽段Mpa(R₁)-Lys(R₂)-Gly-OH和肽段H-Asp(R₃)-Trp-Pro-Cys(R₄)-NH₂縮合得到線性肽Mpa(R₁)-Lys(R₂)-Gly—Asp(R₃)-Trp-Pro-Cys(R₄)-NH₂；（4）將線性肽Mpa(R₁)-Lys(R₂)-Gly—Asp(R₃)-Trp-Pro-Cys(R₄)-NH₂環化形成分子內二硫鍵，得到側鏈保護的環肽；（5）脫除環肽的側鏈保護基；（6）將環肽Lys的側鏈氨基轉化為胍基，得到依替巴肽。具體步驟如下：

1）合成肽段Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH₂

將H-Cys(Trt)-NH₂與Fmoc-Pro-OH進行偶合反應，然后再依次進行洗滌、干燥、減壓蒸餾、加乙醚重結晶后得到二肽Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH₂；然后脫除所述Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH₂中的Fmoc保護基，得到H-Pro-Cys(Trt)-NH₂；再將得到的所述H-Pro-Cys(Trt)-NH₂與Fmoc-Trp-OH進行偶合反應，然后再依次進行洗滌、干燥、減壓蒸餾、加乙醚重結晶后得到三肽Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH₂；

2）合成肽段H-Asp(R₃)-Trp-Pro-Cys(R₄)-NH₂