[發明專利]產生中內胚層細胞及多能游走細胞的方法與細胞群及用途

無效

• 申請號: 201310385240.3
• 申請日: 2008-01-30
• 公開（公告）號: CN103627671A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: S·道爾頓;D·雷諾茲
• 申請（專利權）人: 佐治亞大學研究基金會
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A01N1/02;A61K35/12;A61K35/34;A61P9/10;A61P9/00
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 李婉婉;張苗

1.一種使靈長類多能干細胞分化成中內胚層細胞的方法，該方法包括（a）提供靈長類多能干細胞，和（b）將該靈長類多能干細胞與有效量的GSK抑制劑在細胞分化培養基中接觸至少約18小時，以產生中內胚層細胞，和（c）任選地，分離所述中內胚層細胞，其中，靈長類多能干細胞來自WA01、WA07、WA099、BG01、BG02或iPS細胞系。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述靈長類多能干細胞為人胚胎干細胞。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述GSK抑制劑選自由下列物質所組成的組中：

BIO（2′Z，3′E）-6-溴靛玉紅-3′-肟（GSK3抑制劑IX）；

BIO-丙酮肟（2′Z，3′E）-6-溴靛玉紅-3′-丙酮肟（GSK3抑制劑X)；

（5-甲基-1H-吡唑-3-基）-（2-苯基喹唑啉-4-基）胺（GSK3-抑制劑XIII）；

吡啶并咔唑-環戊二烯基釕復合物（GSK3抑制劑XV)；

TDZD-84-苯甲基-2-甲基-1,2,4-噻二唑-3,5-二酮（GSK3β抑制劑I）；

2-硫代（3-碘苯甲基）-5-（1-吡啶基）-[1,3,4]-惡二唑（GSK3β抑制劑II）；

OTDZT2,4-二苯甲基-5-氧化噻二唑-3-硫酮（GSK3β抑制劑III）；

α-4-二溴苯乙酮（GSK3β抑制劑VII）；

AR-A014418N-（4-甲氧基苯甲基）-N′-（5-硝基-1,3-噻唑-2-基）尿素（GSK-3β抑制劑VIII）；

3-（l-（3-羥丙基）-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]-4-吡嗪-2-基-吡咯-2,5-二酮（GSK-3β抑制劑XI）；

TWS119吡咯嘧啶化合物（GSK3β抑制劑XII）；

L803H-KEAPPAPPQSpP-NH₂或它的肉豆蔻酰形式（GSK3β抑制劑XIII）；

2-氯-1-（4,5-二溴-噻吩-2-基）-乙酮（GSK3β抑制劑VI）；以及

它們的混合物。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述GSK抑制劑是Wnt蛋白。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，所述Wnt蛋白選自由Wnt1、Wnt2、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt10、Wnt14、Wnt14b、Wnt15、Wnt16和它們的混合物所組成的組中。

6.根據權利要求1-3中的任意一項所述的方法，其中，所述GSK抑制劑為BIO（2′Z，3′E）-6-溴靛玉紅-3′-肟（GSK3抑制劑IX）。

7.根據權利要求1-2和4-5中的任意一項所述的方法，其中，所述Wnt蛋白為Wnt3a。

8.根據權利要求1-7中的任意一項所述的方法，其中，所述接觸的步驟的時間范圍為約18-72小時。

9.根據權利要求1-8中的任意一項所述的方法，其中，所述細胞分化培養基至少為添加有一種或多種任選成分的極限必需培養基，所述任選成分選自由生長因子、抗壞血酸、葡萄糖、非必需氨基酸、包括微量元素在內的鹽、谷氨酰胺、胰島素、活化素A、轉鐵蛋白、以及β巰基乙醇所組成的組中。

10.根據權利要求1-9中的任意一項所述的方法，其中，所述細胞分化培養基選自由達爾伯克改良的伊格爾培養基（DMEM）、敲除的達爾伯克改良的伊格爾培養基（KO?DMEM）、Ham′s?F12/DMEM基本培養基（50:50）所組成的組中，所述Ham′s?F12/DMEM基本培養基中還含有白蛋白、抗生素、微量礦物質、抗壞血酸、β-巰基乙醇、成纖維細胞生長因子、和胰島素樣生長因子類似物。

11.根據權利要求1-9中的任意一項所述的方法，其中，所述細胞分化培養基為含有有效量的前白蛋白、青霉素/鏈球菌抗生素、非必需氨基酸、微量礦物質、抗壞血酸、β-巰基乙醇、成纖維細胞生長因子、胰島素樣生長因子類似物、活化素A和Heregulin的DMEM/F12（50:50）。