[發(fā)明專利]一種抑制細(xì)胞增殖的高碘酸氧化的硫酸乙酰肝素

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310382635.8
• 申請(qǐng)日: 2013-08-29
• 公開（公告）號(hào): CN103408677A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張攀;金磊;馬小來;李鋰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市海普瑞藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C08B37/10
• 分類號(hào): C08B37/10;A61K31/727;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種高碘酸氧化的硫酸乙酰肝素(Heparan?Sulfate,?HS)，其制備方法及抑制細(xì)胞增殖方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

硫酸乙酰肝素(Heparan?Sulfate,?HS)又稱葡糖胺聚糖（Glycosaminoglycan，GAG），是具有電負(fù)性的大分子線性聚合物，由葡萄糖醛酸(GlcA)和氨基葡萄糖(Glucosamine)二糖單元通過糖苷鍵重復(fù)聚合而成，其結(jié)構(gòu)如圖1?[Khan?S,?Rodriguez?E,?Patel?R,Gor?J,?Mulloy?B,?Perkins?S.?The?Solution?Structure?of?Heparan?Sulfate?Differs?from?that?of?Heparin.?J?Biol?Chem.?2011,?286(28):?24842–24854]。HS廣泛存在于哺乳動(dòng)物和一些植物體內(nèi)，其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和多樣性是各種生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。

大量研究證實(shí)，HS具有較強(qiáng)的抗腫瘤生長(zhǎng)活性，其作用機(jī)制主要包括抑制腫瘤細(xì)胞增殖和腫瘤血管生成兩方面。HS長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)上的特殊位點(diǎn)，是其能抑制腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)鍵。更重要的是，HS能與多種生長(zhǎng)因子結(jié)合。這些生長(zhǎng)因子多與內(nèi)皮細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)毛細(xì)血管芽生，增加毛細(xì)血管通透性，促進(jìn)細(xì)胞移行和抑制細(xì)胞凋亡等活動(dòng)密切相關(guān)，HS與之結(jié)合，從而阻斷其表達(dá)的信號(hào)通路和調(diào)控血管生長(zhǎng)的能力，進(jìn)而抑制腫瘤血管生成。

鑒于HS在抗腫瘤方面的活性表現(xiàn)，近年來針對(duì)HS結(jié)構(gòu)類似物的研究也日益增多。高碘酸氧化是一種多糖結(jié)構(gòu)修飾方法，有文獻(xiàn)[Lapierre?F,?Holme?K,?Lam?L,?Tressler?RJ,?Storm?N,?Wee?J,?Stack?RJ,?Castellot?J,?Tyrrell?DJ.?Chemical?modifications?of?heparin?that?diminish?its?anticoagulant?but?preserve?its?heparanase-inhibitory,?angiostatic,?anti-tumor?and?anti-metastatic?properties.?Glycobiology.?1996,?6(3):?355-366.]報(bào)道肝素經(jīng)高碘酸氧化修飾后，提高了其抗腫瘤活性。但至今為止，沒有關(guān)于高碘酸氧化修飾HS的相關(guān)報(bào)道，而本發(fā)明首次提供了一種高碘酸氧化的HS,?其具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種高碘酸氧化的HS,其分子量Mw?=14063?Da，分子量分布為1277～45951?Da。

本發(fā)明還提供了一種高碘酸氧化的HS的制備方法：

?????取HS?0.1～2.0?g，溶脹于10～40?mL水中，加入10～40?mL?0.05～0.5?mol/L?NaIO₄，調(diào)pH值為5.2，充分混勻，置于暗處于4?℃反應(yīng)24?h，加入乙二醇終止反應(yīng)，用蒸餾水于4?℃透析72?h，將樣品凍干回收，將氧化后的HS溶于少量水中，在攪拌條件下，加入約100?mg固體NaBH₄，用HCl調(diào)pH值為3.0，反應(yīng)3?h，再用NaOH中和，用蒸餾水于4?℃透析72?h，將樣品凍干回收，制得高碘酸氧化的HS。

所述的反應(yīng)條件優(yōu)選為0.2～1.0?g?HS溶脹于20～30?mL水中，加入20～30?mL?0.1～0.3?mol/L?NaIO₄，調(diào)節(jié)pH值為5.2，充分混勻，置于暗處于4?℃反應(yīng)24?h，進(jìn)一步優(yōu)選為0.5?g?HS溶脹于20?mL水中，加入20?mL?0.2?mol/L?NaIO₄。

本發(fā)明還提供了上述高碘酸氧化的HS在抑制腫瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的用途。本發(fā)明所述的抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性可以用于包括治療和預(yù)防腫瘤及其轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

附圖說明

圖1?A和B分別為HS的可變雙糖序列(R=?Ac,?H或????????????????????????????????????????????????；R₁=Ac,?H或，R和R₁可以相同也可以不同)?。

????圖2為高效液相凝膠排阻色譜法測(cè)定高碘酸氧化的HS分子量的高效液相色譜圖。

具體實(shí)施方式

以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容不局限于以下實(shí)施例。