[發(fā)明專利]一種高效提取綠豆α-淀粉酶抑制劑的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310381655.3
• 申請日: 2013-08-28
• 公開（公告）號: CN103432190B
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王琦;王榮;侯沁文;雷海英
• 申請（專利權(quán)）人: 保定鮮爾康生物工程有限責(zé)任公司
• 主分類號: A61K36/48
• 分類號: A61K36/48;A61P3/10
• 代理公司: 北京志霖恒遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11435
• 代理人: 劉敏

本發(fā)明公開了一種高效提取綠豆α?淀粉酶抑制劑的方法，所述方法是采用凝膠柱層析和乙醇沉淀從綠豆中提取并純化出組分均一的α?淀粉酶抑制劑，同時就綠豆α?淀粉酶抑制劑提取條件對豬胰α?淀粉酶抑制活性的影響做了分析，確定了綠豆α?淀粉酶抑制劑的最佳提取工藝條件。按照本發(fā)明方法提取的綠豆α?淀粉酶抑制劑對溫度具有較高的穩(wěn)定性，因此在開發(fā)為一種安全、天然的降糖藥物中有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種綠豆α-淀粉酶抑制劑的提取方法，具體說，是涉及一種以效率高，產(chǎn)物溫度穩(wěn)定性高而著稱的綠豆α-淀粉酶抑制劑的提取方法。

背景技術(shù)

隨著人們生活水平的提高和平均壽命的延長，無論是發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國家，肥胖、糖尿病等疾病患者都在逐年增加，減肥、降血糖等相關(guān)研究受到了越來越高的重視。由于綠豆α-淀粉酶抑制劑(α-Amylase Inhibitor，α-AI)是一種糖苷水解酶抑制劑，它通過抑制腸道內(nèi)唾液及胰淀粉酶的活性，阻礙食物中碳水化合物的消化吸收，選擇性地減少糖分?jǐn)z取，降低血糖和血脂的含量，減少脂肪的合成，進(jìn)而起到降糖、減肥及預(yù)防肥胖的功效。國外α-AI研究起步較早，早在上世紀(jì)四十年代就有小麥種子中α-AI的報道。它是一種電遷移率為0.2，分子量為21kDa的蛋白質(zhì)。但在隨后的二十五年間很少有這方面的報道。直到上世紀(jì)七十年代，由于它在醫(yī)學(xué)上的價值，α-AI才成為研究的熱點。

綠豆(Vigna radiatα)又名青小豆，因其顏色青綠而得名，它是一種豆科、蝶形花亞科豇豆屬植物，根據(jù)營養(yǎng)專家分析，綠豆的預(yù)防疾病指數(shù)為245.93，證明綠豆對疾病的康復(fù)具有相當(dāng)高的價值。綠豆供食用，亦可提取淀粉，制作豆沙、粉絲等；也可入藥，有清涼解毒、利尿明目之效。常食綠豆，對高血壓、動脈硬化、糖尿病、腎炎有較好的治療輔助作用。此外，綠豆還可以作為外用藥，嚼爛后外敷治療皮膚濕疹。

當(dāng)前，已經(jīng)從微生物(主要集中在鏈霉菌屬)、小麥、玉米、豆類、野生莧屬等植物種子中分離得到α-AI，它的分子量大小在9～63kDa。目前國內(nèi)從小麥中提取α-AI的研究比較多，但從綠豆中提取α-AI，尤其是抑制活性高的，尚未見報道。

此外，現(xiàn)有技術(shù)中α-AI大都采用傳統(tǒng)的加熱溶劑浸提法制備，在提取過程中加熱至53℃以上，容易導(dǎo)致部分淀粉發(fā)生糊化，溶液粘度增大，給后續(xù)離心分離操作帶來障礙；并且長時間加熱會降低產(chǎn)品的生物活性。提取過程中，由于工藝限制，原料不能粉碎過細(xì)，導(dǎo)致細(xì)胞壁的破碎度降低，不利于細(xì)胞中α-AI完全釋放，需要消耗大量提取溶劑進(jìn)行長時間萃取。因此傳統(tǒng)的加熱溶劑浸提法在制備α-AI時，具有提取時間長、生產(chǎn)成本高等缺點。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種以效率高，產(chǎn)品溫度穩(wěn)定性高而著稱的綠豆α-淀粉酶抑制劑的提取方法。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種高效制備綠豆α-淀粉酶抑制劑的方法，其特征在于：采用凝膠柱SephedexG-75層析和乙醇沉淀從綠豆中提取并純化出組分均一的α-淀粉酶抑制劑。

作為一種優(yōu)選方案，所述的制備方法具體包括如下步驟：

a)將脫脂綠豆粉在35～50℃溫度范圍浸泡4～20小時，然后粉碎制成100目以下的細(xì)粉；經(jīng)攪拌，12000g,4℃，離心30min去渣；

b)用凝膠柱SephedexG-75提取，即先以HAc-NaAc緩沖液平衡凝膠柱，再將步驟a)離心后取得的上清液加入HAc-NaAc緩沖液至終濃度為0.02mol/L,以0.5mL/min流速上樣，再以HAc-NaAc緩沖液洗脫提取，收集蛋白峰并逐管測定淀粉酶抑制劑活性，收集活性峰洗脫液，與預(yù)先放置于-20℃的乙醇，按照1∶1～1∶3體積比混合，-20℃沉淀，提取時間即第一次SephedexG-75提取收集活性峰洗脫液與乙醇沉淀-20℃放置的時間，范圍為1～2h。