[發明專利]一種高效提取綠豆α-淀粉酶抑制劑的方法

有效

• 申請號: 201310381655.3
• 申請日: 2013-08-28
• 公開（公告）號: CN103432190B
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 王琦;王榮;侯沁文;雷海英
• 申請（專利權）人: 保定鮮爾康生物工程有限責任公司
• 主分類號: A61K36/48
• 分類號: A61K36/48;A61P3/10
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 劉敏

1.一種制備綠豆α-淀粉酶抑制劑的方法，其特征在于，所述的制備方法包括如下步驟：

a) 將脫脂綠豆粉在 35～50℃溫度范圍浸泡 4～20 小時，然后粉碎制成 100 目以下的細粉；經攪拌，12000g，4℃離心 30min 去渣；

b) 用凝膠柱 SephedexG-75 提取，即先以 HAc-NaAc 緩沖液平衡凝膠柱，再將步驟a) 離心后取得的上清液加入 HAc-NaAc 緩沖液至終濃度為 0.02mol/L，以 0.5mL/min 流速上樣，再以 HAc-NaAc 緩沖液洗脫提取，收集蛋白峰并逐管測定淀粉酶抑制劑活性，收集活性峰洗脫液，與預先放置于-20℃的乙醇，按照 1 ∶ 1 ～ 1 ∶ 3 體積比混合，-20℃沉淀，提取時間即第一次 SephedexG-75 提取收集活性峰洗脫液與乙醇沉淀 -20℃放置的時間，范圍為 1～2h；HAc-NaAc 緩沖液濃度為 0.02mol/L，pH 為 4.0；

c)12000g，室溫離心 20min，去除上清液，清洗并減壓干燥后制得α-AI 粗提品；

d) 將α-AI 粗提品溶于適量的 HAc-NaAc 緩沖液中，再使用 Sephedex G-75 凝膠柱，先利用 HAc-NaAc 緩沖液平衡凝膠柱，再將溶有α-AI 粗提品的 HAc-NaAc 緩沖液上樣，流速為0.5mL/min，以 HAc-NaAc 緩沖液洗脫，流速為 0.5mL/min，得到一蛋白主峰，逐管檢測淀粉酶抑制活性，進而收集活性峰，經透析、濃縮后減壓干燥，獲得α-AI；HAc-NaAc 緩沖液濃度為 0.02mol/L，pH 為 4.0。