[發明專利]一種稻曲病菌薄壁分生孢子的平板培養制備方法

有效

• 申請號: 201310378599.8
• 申請日: 2013-08-27
• 公開（公告）號: CN103436480A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 張君成;覃茜
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 王素娥

1.一種稻曲病菌薄壁分生孢子的平板培養制備方法，其特征在于，操作步驟如下：

1)初始薄壁分生孢子液的制備：

a）初始薄壁分生孢子的來源：采用大家熟知的二期培養方法，用菌絲體通過振蕩培養方式，獲得含有大量薄壁分生孢子的培養產物；或者采用培養田間病稻粒上的新鮮厚壁分生孢子的方法，獲得含有大量薄壁分生孢子的培養產物；

b)孢子純化處理：將獲得的薄壁分生孢子的培養產物進行孢子純化處理，純化處理方法是，用2層紗布過濾去除培養產物中的菌絲；然后將過濾液進行離心并收集沉淀孢子；接著用無菌水將沉淀孢子懸浮洗滌，再進行一次離心，獲得純凈的孢子團，用無菌水將孢子團懸浮分散均勻即成為薄壁分生孢子液，保存備用；

2)產孢培養基平板的制備：

采用PSA培養基的半量成分作為產孢培養基，產孢培養基為：馬鈴薯100g；蔗糖10g；瓊脂20g；水1000ml，通過常規滅菌后倒成培養皿平板，即制成產孢培養用的產孢平板；

3)產孢培養：

取步驟1)保存備用的薄壁分生孢子液，滴于備好的產孢培養基平板面上，用平滑的玻璃棒抹涂平板面，使孢子充分均勻分布于平板面上，回蓋后轉入溫度為28℃條件下培養5天；

4)新的薄壁分生孢子的收集：

上步驟培養5天后，產孢培養基平板上長出大量直徑約為0.5～1.5mm的產生薄壁分生孢子的小菌落，此時收集新的薄壁分生孢子；收集方法是，取清水注在產孢平板面上，然后用普通毛刷洗刷產孢培養基平板表面菌落，使得菌落上的孢子釋放到水中，將洗刷孢子的水液收集起來，即為含有大量新的稻曲病菌薄壁分生孢子的培養產物；

5)薄壁分生孢子純化處理：

將所收集的培養產物進行薄壁分生孢子純化處理，純化處理方法是，用2層紗布過濾去除培養產物中的菌絲；然后將過濾液進行離心處理并收集沉淀孢子；接著用無菌水將沉淀孢子懸浮洗滌，再進行一次離心處理，可獲得非常純凈的薄壁分生孢子團，用無菌水將這孢子團懸浮分散均勻即成為稻曲病菌薄壁分生孢子液。